[发明专利]一种制备黑蔓素G-1的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种制备黑蔓素G-1的方法。

背景技术

黑蔓素G-1（Triptogelin G-1）是一种倍半萜类化合物，分子式为C₂₆H₃₄O₅，分子量为426.55。为白色粉末，mp.137-139℃。来源于卫矛科大芽南蛇藤、南蛇藤、冠叶南蛇藤、黑蔓雷公藤等植物中，其中以大芽南蛇藤含量较高。杨华等对大芽南蛇藤水解产物的生物活性研究表明，药理研究表明，黑蔓素G-1具有杀虫活性，可作为拒食剂。

经文献检索，尚未发现黑蔓素G-1的工业提取纯化方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备黑蔓素G-1的方法。

本发明提供的从大芽南蛇藤种子中提取制备黑蔓素G-1的方法步骤如下：

（1）将大芽南蛇藤种子药材粉碎，用乙醇微波提取2-3次，每次10-60min，合并提取液旋转蒸发浓缩得到浸膏；

（2）将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液分散，乙酸乙酯和水的体积比为8:2，静置分层10-24h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物，将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液溶解，过滤，正己烷和甲醇的体积比为2:1，滤液静置分层4-8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物；

（3）甲醇萃取物通过硅胶柱层析，以正庚烷-乙醚为洗脱剂进行梯度洗脱，得到黑蔓素G-1流分；

（4）将黑蔓素G-1流分浓缩后用等体积甲醇分散，以尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩得到黑蔓素G-1。

所述步骤（1）中大芽南蛇藤种子粉碎过20-60目筛。

所述步骤（3）中正庚烷-乙醚梯度洗脱是按正庚烷-乙醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱。

所述步骤（4）中尼龙膜为孔径0.45μm的尼龙膜。

所述步骤（4）中甲醇和水的混合溶液是用73%甲醇水溶液。

本发明的特点在于：首次从大芽南蛇藤种子中分离得到黑蔓素G-1，制备方法简单、采用乙醇微波提取，进一步用双水相萃取和柱层析纯化结晶，以及制备液相分离纯化得到高纯度的晶体，为大规模自动化生产提供了可能，节省了分离时间，提高了分离率。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但本发明不限于此。

实施例1：

将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过40目筛，用85%乙醇微波提取3次，每次30min，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液（乙酸乙酯和水的体积比为8:2）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层20h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液（正己烷和甲醇的体积比为2:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层4h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析（甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:3），按正庚烷-乙醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-1的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-1，纯度约为81%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用0.45μm尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-1纯品。

实施例2：

将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过20目筛，用90%乙醇微波提取2次，每次60min，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液（乙酸乙酯和水的体积比为8:2）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层10h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液（正己烷和甲醇的体积比为2:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层5h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析（甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:4），按正庚烷-乙醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-1的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-1，纯度约为82%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用0.45μm尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-1纯品。

实施例3：