[发明专利]一种抗肿瘤五环三萜类化合物及其提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从肉果秤锤树中提取的抗肿瘤五环三萜类化合物，并提供提取方法。 

背景技术

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，发病率在妇科恶性肿瘤中位居第三，死亡率居首位。每年成千上万人死于卵巢癌，且死亡人数还在持续不断的攀升，严重威胁着女性的生命健康。临床上治疗卵巢癌的方法主要是使用手术切除结合化学药物疗法，但手术切除无法阻止卵巢癌进一步转移；同时，化疗药物的副作用也较大，常引起胃肠道反应、口腔炎、骨髓抑制、脱发、神经系统不良反应和肾毒性等不良反应，给患者造成巨大痛苦。因此，筛选高效低毒的特异的抗肿瘤药物对治疗卵巢癌具有重要意义。 

三萜类化合物分子量小、低毒并具有多种生物活性，是目前抗肿瘤药物筛选研究的热点。三萜类化合物是一类结构多变的单体化合物，在自然界具有20000多种含一个共同三萜骨架的异构体，其药理活性自发现以来便受到了广泛关注。近年来研究发现该类化合物具有消炎、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等生物活性。如，皂苷、齐墩果酸、白桦酸、雷公藤红素、扁蒴藤素、羽扇豆醇和艾维先兹等三萜类化合物有抗炎、护肝或抗肿瘤功效；而多数中草药中的主要活性成分—乌索酸，也已被证实具有诱导分化、抗增殖和抗肿瘤活性。因此，三萜类化合物已成为抗肿瘤药物筛选的重要资源库。 

肉果秤锤树，学名为Sinojackia sarcocarpa L.Q.Luo，分类为野茉莉科（亦名安息香科）(Styracaceae)，秤锤树属。本申请发明人从该肉果秤锤树种提取了一种新的五环三萜类化合物，其结构和药物性能此前未见报道，研究发现该化合物在体内和体外均具有较好的抗肿瘤活性，而且对细胞毒性小，因此可作为抗肿瘤药物。 

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种抗肿瘤五环三萜类化合物，该化合物具有抗肿瘤活性，对卵巢癌的抑制活性尤其明显。 

本发明的另一个目的是提供一种抗肿瘤五环三萜类化合物的提取方法。 

为实现本申请的第一个目的，本申请的技术方案是该抗肿瘤五环三萜类化合物由肉果秤锤树中提取分离，其化学结构式为： 

 

其化学名称为2a,3a,19β,23β-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid。

以下简称THA。HPLC分析显示提取的THA纯度为97.97%（图1所示）。 

本发明的另一个目的是提供了抗肿瘤五环三萜类化合物的提取方法，包括以下步骤（图2）： 

（1）肉果秤锤树的干叶子用乙醇超声浸取后，浓缩得到粗提物；

（2）将（1）中的粗提物加入蒸馏水使之混悬于水中，利用石油醚和乙酸乙酯进行萃取得到相应的提取物；

（3）将（2）中得到的萃取物经硅胶柱层析分成20部份；

（4）将（3）中的第6部分使用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水，通过高速逆流色谱技术分离得到目标化合物，即为抗肿瘤五环三萜类化合物。

本发明具有以下优点： 

从肉果秤锤树叶子提取得到的新的五环三萜类化合物具有抗肿瘤活性较好、对正常细胞毒性小的优点，而且其提取方法简单、快速。

通过下述实施例和实验例，进行补充说明：THA具有较好的抗肿瘤活性，对卵巢癌的抑制活性尤其明显。体外实验发现，THA对卵巢癌细胞A2780的IC₂₀、IC₅₀、IC₈₀分别为11.2 μg/ml、24.3 μg/ml、34.8 μg/ml。MTT实验结果显示，THA可以抑制卵巢癌细胞A2780增殖，40 μg/ml的THA对A2780细胞增殖的抑制率达90%。克隆形成实验结果发现，THA对卵巢癌细胞A2780和肝癌细胞HepG2的增殖有明显抑制作用，而对卵巢正常细胞IOSE144和肝脏正常细胞QSG7701的毒性较小。动物实验发现，以25 mg/kg剂量的THA注射裸鼠，抑瘤率达40%，50 mg/kg剂量时达60%；而不同浓度THA处理对裸鼠体重无影响，各项生命特征基本正常。 

下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步介绍。 

附图说明

   图 1 THA结构确定图；（A） HPLC检测THA的纯度；（B）THA结构式； 

图2  THA提取的流程示意图；

   图3  MTT测定THA对细胞增殖的抑制作用。（A）不同浓度THA对细胞增殖的抑制作用；（B）不同时间点THA对细胞增殖的抑制作用；