[发明专利]一种海洋过氧化氢酶产酶菌及其定向筛选方法

权利要求书

1.一种过氧化氢酶产酶菌，分类命名为中华动性杆菌(Planomicrobium chinense），保藏编号为CGMCC No.6043。

2.根据权利要求1所述的过氧化氢酶产酶菌，其特征在于：所述菌株具有以下特征：

（1）菌落形态：菌落呈圆形，表面光滑，边缘平整，微凸起，黄色；

（2）细胞形态：革兰氏阳性菌，细胞显微镜下呈现运动性，形态为球状居多（0.8×1.0μm）；

（3）生理生化特征：好氧生长；水解明胶，不水解淀粉、酪素、吐温80和七叶树素；能利用葡萄糖产酸，不能利用蔗糖、棉子糖、木聚糖、乳糖、阿拉伯糖、纤维二糖、木糖、鼠李糖、密二糖、甘露糖或甘露醇产酸。

3.根据权利要求1所述的过氧化氢酶产酶菌，其特征在于：所述菌株的16S rRNA基因包含如Seq ID No.1所示的核苷酸序列。

4.一种利用权利要求1所述的菌株生产过氧化氢酶的方法，包括以下步骤：

（1）将CGMCC No.6043菌株接种至天然海水液体培养基，培养后加入过氧化氢进行刺激培养作为种子液；

（2）将种子液转接至发酵培养基中进行发酵培养，然后加入过氧化氢刺激培养，即可得到具有过氧化氢酶活力的发酵液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（1）中的天然海水培养基的配方包括0.1-0.5%蛋白胨，0.1-0.5%Casamino acid，0.005-0.05%酵母提取物，其余为天然海水，调节pH为6.8-7.5。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（2）中的发酵培养基配方包括1-10g/L酵母抽提物，0.5-5g/L蛋白胨，其余为天然海水，pH为6.5-8.0。

7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于：根据需要，可任选对具有酶活力的发酵液进行处理，从中分离纯化出过氧化氢酶的产物。

8.一种定向筛选过氧化氢酶高产菌株的方法，包括如下步骤：

（1）、将海水样品在无菌条件下加入半固体培养基中，并加入预先过滤除菌的碳和氮源，震摇富集培养；

（2）、对富集培养液进行无菌稀释涂布，挑选单克隆进行斜面保存；

（3）、将分离获得的菌株转接至天然海水液体培养基进行摇瓶发酵，采用分光光度法进行过氧化氢酶活性复筛，最终筛选出过氧化氢酶活相对较高的菌株。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（1）中半固体培养基通过如下方法制备：将天然海水采用NaOH或HCl微调pH至6.8-7.5，加入质量百分数为0.5-1%的琼脂湿热灭菌，待温度降低至40-60℃左右在无菌条件下加入过滤除菌的0.5-10mM过氧化氢，混匀后冷却凝固制成半固体培养基。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（3）中，天然海水液体培养基包括0.1-0.5%蛋白胨，0.1-0.5%Casamino acid，0.005-0.05%酵母提取物，其余为天然海水，调节pH为6.8-7.5。