[发明专利]毒蜡样芽胞杆菌快检试剂

说明书

技术领域    本发明涉及一种毒蜡样芽胞杆菌快检试剂，特别是最常见的在外环境中生活力较强，在水、牛乳及肉类食品中能生存几个月，最适温度下繁殖迅速的毒蜡样芽胞杆菌的快检试剂。毒蜡样芽胞杆菌食物中毒多由米饭、动物性食品，特别是肉类引起（如病死牲畜肉、熟肉制品），也可由家禽、蛋类、奶类食品引起。以急性胃肠炎为主，主要症状有呕吐，腹泻，腹痛，粪便为黄绿色水样便。发热３８℃－４０℃。重病人出现寒战，惊厥，抽搐和昏迷。老人，儿童和体弱者如不及时进行急救处理也可导致死亡。传统常规检测诊断方法为细菌培养分离，选择标准典型菌株再进行血清学鉴定检测。整个检测确诊过程耗时长、一般需要72-120小时，灵敏度不高，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌毒蜡样芽胞杆菌的应用上具有明显的优势。从而减少由于检测手段落后而造成对人体健康的危害，具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。

背景技术    本发明的目的在于提供一种毒蜡样芽胞杆菌快检试剂,蜡样芽胞杆菌引起食物中毒。全年都可发生，多由米饭、动物性食品如肉类引起引起。传统常规检测诊断方法是要经过标本采集、分离鉴定、小白鼠喂饲实验、双份血清凝集实验、沉淀实验等鉴定实验才能确诊。传统生化鉴定试验周期长，操作繁琐，试剂质量无法保证，严重影响了致病菌确认工作、选择性分离培养的培养基上挑选可疑菌落需要经验，存在漏检的可能，而毒蜡样芽胞杆菌的肠毒素稳定性很高，加工后的食物虽然有时检不出，但仍有可能存在肠毒素，而肠毒素的常规检验方法需要做动物实验，难度大，周期长。整个检测确诊过程耗时长约4-15天。本发明是将增菌液中增加了特异性的毒蜡样芽胞杆菌多价及单价血清，使检测确诊过程缩短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97％以上。检测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强。

发明内容    本发明的要点在于选择合适的培养基组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌、无菌制备血清等工艺而成一种毒蜡样芽胞杆菌快检试剂。

本发明选择的快检试剂配方如下（克/每升蒸馏水）蛋白胨 5.0-10.0；乳糖 3.5-4.5；磷酸氢二钠 4.0-5.0；磷酸二氢钠5.0-6.0；复合生长因子10.0-20.0；无菌毒蜡样芽胞杆菌多价及单价血清 10-20ml；蒸馏水加至1000 mL，调pH7.1

快检试剂呈无色或淡黄色透明液体，无任何沉淀物。食物源性中毒样品在接种培养2-6小时时，液面交界有处有白色沉淀凝集，镜下有凝集包团，为阳性，即可确诊。磷酸盐为缓冲剂，保持培养基pH稳定，有利致病菌的生长繁殖。

本发明产品的制备方法是：

1)、将蛋白胨、乳糖 、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、复合生长因子混合于900 mL蒸馏水加热溶解，调pH7.1，121℃15min高压灭菌；

2)、冷却后以无菌操作将两液合并，加无菌毒蜡样芽胞杆菌多价及单价血清混匀，分装于灭菌容器内备用。

本发明具有以下优点：(1) 快检试剂营养丰富、配制简单；(2) 临床应用效果满意，解决了床边接种的困难，污染小； (3) 检测方法简单、时间短、选择性强、检出率高； (4) 接种样本2-6小时后，即能得到液体筛选增菌凝集包团，便于观察菌落生长情况，稳定性好；（5）对快速准确诊断，抢救病人对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。

具体实施方式    下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：

按照下表所列数据（克/每升蒸馏水）及其所述步骤进行配置：

配方一：

蛋白胨 5.0-10.0；乳糖 3.5-4.5；磷酸氢二钠 4.0-5.0；磷酸二氢钠5.0-6.0；复合生长因子10.0-20.0；无菌毒蜡样芽胞杆菌多价及单价血清 10-20ml；蒸馏水加至1000 mL，调pH7.1。   

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配方二：

蛋白胨 6.0-8.0；乳糖 4.0-4.5；磷酸氢二钠 4.5-5.0；磷酸二氢钠5.5-6.0；复合生长因子14.0-20.0；无菌毒蜡样芽胞杆菌多价及单价血清 14-20ml；蒸馏水加至1000 mL，调pH7.1。