[发明专利]一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

健康动物肠道的各个部分都定殖着一种典型的微生物，并与动物形成有益的共生关系。由于集约化高密度养殖方式的出现，家畜对肠道菌群失衡相当敏感，从而导致对营养物质的消化和吸收能力降低，生长迟滞。为了克服这些困难，人们向动物饲粮中添加抗生素。事实也表明，这一做法在降低腹泄和促进生长方面相当有效。可是，有害微生物抗药性的产生对兽药抗生素的使用造成了严重的干扰，并且抗生素本身的效用也因此而降低，且存在残留问题及与人类致病菌产生交叉耐药性的风险，从而对人类健康造成潜在危害。抗生素抗药性从动物传递给人的可能性及消费者对此的警醒，使得禁止在饲料中使用抗生素及限制兽用抗生素的使用成为畜禽养殖的必然趋势。

基于以上原因，寻求一种更天然的饲用添加剂，即益生菌，则成为人们广泛关注的热点。早期关于酸乳产品对人类有益作用的研究发现，肠道微生物群落中最有益的部分为乳酸菌。乳酸菌在各种商品益生菌制剂中最为常见，其次为芽胞杆菌。

在动物的胃肠道中，由于环境pH值、渗透压、可发酵底物等因素的变化，菌群的分布呈现出明显的区域性(表1)。因而由单一菌株或单一菌株复合物组成的乳酸菌类产品很难在整个肠道中形成优势菌群。

表1.猪和禽胃肠道主要部位分布的主要菌群。

中国专利申请号：201010122147.X公开了一种由短乳酸杆菌(Lactobacillus brevis)、德氏乳酸杆菌(Delbrueckii subsp.Lactis)、干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)、乳酸乳酸杆菌(Lactobacillus lactis)、戊糖乳酸杆菌(Lactobacillus pentosaces)、布氏乳酸杆菌、植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)和耐酸乳酸杆菌(Lactobacillus acetotolerans)复合经冷冻干燥制得的复合乳酸菌饲料添加剂。

以上方法仅是几种购买乳酸菌株的简单复合，菌株的最初来源很可能并不是动物肠道，因而不能确定这些菌株是否适应动物肠道环境。乳酸菌是动物肠道前段(十二指肠、空肠和回肠)的优势菌群，因而以上方法忽略了益生菌对动物肠道后段的作用，没有考虑动物的整个肠道。产品未经包被处理，不耐贮存、不耐高温。

综上所述，所有乳酸菌类饲料添加剂都是由单一菌株构成或由几个种属的单一菌株复合而成，因此添加到饲料中后不能全面覆盖动物的整个肠道，很难在复杂的动物肠道中形成优势菌群，发挥不出乳酸菌作为益生菌应有的效果。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明从动物肠道不同部位分离乳酸菌和多形拟杆菌菌株并进行培养，得到适应动物肠道不同部位环境的菌株，经喷雾急速冷冻干燥包被后，再复合形成能覆盖动物整个肠道的复合益生菌产品，从而克服现有产品菌株单一或覆盖位点不全面的缺点。

一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂，是由40-60％的嗜酸乳酸杆菌、15-20％的嗜淀粉乳酸杆菌、5-10％唾液乳酸杆菌、5-10％嗜热链球菌、5-l0％多形拟杆菌和5-10％的葡萄糖经喷雾冷冻干燥复合形成。所有菌株均分离自猪肠道食糜。

一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂的制备方法：其特征在于，包括以下步骤：

A、动物肠道中嗜酸乳酸杆菌、嗜淀粉乳酸杆菌、唾液乳酸杆菌、嗜热链球菌和多形拟杆菌的分离、纯化与鉴定：

A1、样本的采集与稀释：无菌取猪空肠和盲肠内容物各1g，分别置于含有小玻璃珠的灭菌三角瓶内(50mL)，按1∶10(g∶V)的比例加入灭菌生理盐水，充分振荡30分钟，使其成为均匀的悬液，此悬液为第一个稀释度(10-1)，另取灭菌小试管若干，每支加入灭菌生理盐水4.5mL，取10-1稀释液0.5mL加入第二管混匀得第二稀释度(10-2)，依次类推作递减稀释，终稀释度为10-11；

A2、配制选择性培养基：

嗜酸乳酸杆菌、嗜淀粉乳酸杆菌和唾液乳酸杆菌的选择性培养基制备方法如下：酪朊水解物10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、柠檬酸二铵2g、吐温80 1.0mL、三水醋酸钠25g、磷酸二氢钾6g、七水硫酸镁0.58g、七水硫酸亚铁0.03g、四水硫酸猛0.15g、琼脂15g，调节pH至5.4，于121℃灭菌15min，倾注灭菌平皿，-4℃保存备用；