[发明专利]冬凌草纳米微粒的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将冬凌草与去离子水或无水乙醇中的一种或两种组合溶剂按1:1～20混合后，在回流提取温度为70℃～95℃下回流提取30min～300min，趁热过滤，得到滤渣和滤液；

（2）将步骤（1）得到的滤液在60℃~90℃的条件下进行减压蒸馏浓缩至原体积的1/2～1/10；

（3）将步骤（2）得到的浓缩滤液进行脱色、脱蛋白质处理，然后将处理液用95%乙醇调节至溶液中乙醇浓度为50%~60%，低温静置12~24小时，离心分离得到沉淀物和上清液；

（4）将沉淀物用10~50倍的去离子水充分溶解，然后上凝胶柱进行层析，用超纯水洗脱，洗脱速度为0.1ml~1.0ml/min，用紫外分光光度法进行跟踪并收集洗脱液；

（5）将步骤（4）的洗脱液与超临界CO₂抗溶剂系统的液体泵相连；

（6）启动超临界CO₂抗溶剂系统，结晶釜的温度为40℃~80℃，结晶釜的压力为8Mpa~50Mpa，CO₂的流量为30~300L/hr；

（7）启动超临界CO₂抗溶剂系统的夹带剂泵和步骤（4）中的液体泵，洗脱液与甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种夹带剂的进料比为10:1~1:10，洗脱液与夹带剂先混合后，经超临界CO₂抗溶剂系统的纳米喷嘴喷入结晶釜中，流量控制在100ml~1000ml/hr；洗脱液中的溶剂和夹带剂进入分离釜中解析并分离，洗脱液中的溶质在结晶釜内析出为微细颗粒，该微细颗粒即为冬凌草纳米微粒。

2.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述步骤（7）中的纳米喷嘴的口径为1～100nm。

3.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的分离釜温度为35℃～60℃，分离压力为4Mpa～7Mpa。

4.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的分离釜温度为50℃，分离压力为5Mpa。

5.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的CO₂气体的纯度不低于99%。

6.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的凝胶柱层析所用的填料为葡聚糖凝胶系列、琼脂糖凝胶系列或丙烯葡聚糖凝胶系列中的一种。

7.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于将步骤（3）离心得到的上清液用95%乙醇调节至溶液中乙醇浓度为60%~70%，低温静置12~24小时，离心分离得到沉淀物II和上清液；将上述离心得到的上清液用95%乙醇调节至溶液中乙醇浓度为70%~80%，低温静置12~24小时，离心分离得到沉淀物III和上清液；再将上述离心得到的上清液用95%乙醇调节至溶液中乙醇浓度为80%~90%，低温静置12~24小时，离心分离得到沉淀物IV；将上述得到的沉淀物II、沉淀物III和沉淀物IV与步骤（3）中得到的沉淀物合并。

8.根据权利要求1所述的冬凌草纳米微粒的制备方法，其特征在于将步骤（1）滤渣重复步骤（1）操作1次，合并滤液。

9.一种如权利要求1所述的制备方法制备的冬凌草纳米微粒在防治骨质疏松症方面的应用。

10.一种如权利要求1所述的制备方法制备的冬凌草纳米微粒在制备防治骨质疏松症方面药物中的应用。