[发明专利]一种用于蛋白质或者活性多肽生产和递送的食品级重组乳酸菌及其制备方法

权利要求书

1.经过基因工程改造的食品级乳酸菌活载体，用于蛋白质或者活性多肽生产和递送。其特征在于，其包括表达和生产外源蛋白质或者活性多肽的thyA基因缺失的乳酸菌菌株，插入到乳酸菌染色体的外源蛋白质或者活性多肽的表达框。

2.按照权利要求1的乳酸菌菌株，包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)，以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subspecies lactis)等。

3.按照权利要求1的重组乳酸菌菌株，外源蛋白质或者活性多肽的表达框通过与thyA基因的置换而整合到乳酸菌染色体上，并敲除了抗生素抗性基因。

4.按照权利要求1的外源蛋白质或者活性多肽，是指抗原蛋白质、抗体蛋白质、营养性蛋白质、活性多肽、蛋白类激素、细胞因子等。其中细胞因子包括IL-1β，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15，IL-16，IL-17，IL-18，IL-19，IL-20，IL-21，IL-23，IL-24，IL-25，IL-26，IL-32，cMGF，LT，GM-CSF，M-CSF，SCF，IFN-γ，IFNλ，EPO，G-CSF，LIF，OSM，CNTF，GH，PRL，IFNα，IFNβ等。

5.按照权利要求1的外源蛋白质或者活性多肽，其特征在于，其编码基因的核苷酸序列已经根据乳酸菌对密码子的使用偏好性进行了优化。其优化原则为：

TTC→TTT；GTA→GTT；TCC→TCT；GAG→GAA；TGC→TGT；AGA→CGT；AGG→CGT

6.按照权利要求1的纳米抗体或者亲和多肽表达框，其特征在于，其包括组成型启动子序列、信号肽序列和锚定子序列(当用于分泌表达时，不包含锚定子序列)。