[发明专利]药用猴头菌菌丝体固体液体混合培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物培育技术领域，尤其是药用猴头菌菌丝体的培养方法。

背景技术

猴头菌，是因为其子实体形状酷似小猴子的头而得名，是一种兼有食用 和药用价值的名贵食用菌，性平、味甘，能利五脏、助消化，滋补、抗癌， 治疗神经衰弱，用于治疗消化不良、胃溃疡、食道癌、胃癌、十二指肠癌、 喷门癌等消化系统的疾病与肿瘤。目前猴头菌已成功应用于现有产品中，如 市售的猴头健胃灵胶囊，其中猴头菌是该产品的主要成份。

目前猴头菌的生产途径主要有三种：1、人工栽培，优点是简单易行，成 本低；缺点是栽培周期长，约3个月；2、固体发酵，用固体培养基培养猴头 菌菌丝体，以获得次生代谢产物，其优点是：培养基简单且来源广泛，价格 便宜；发酵过程一般不需要严格的无菌操作；培养过程供氧和温度可采用直 接空气强制通风来控制；发酵残渣的处理简单，直接作为饲料或肥料；缺点 是：培养基水分活度低，培养基不均匀且不易搅拌，菌体的生长、对营养物 质的吸收和代谢产物的分泌都不均匀，使得发酵参数的监测和控制困难，因 此连续操作和自动化很困难；微生物呼吸和代谢所产生的热量的温度控制非 常困难；采用固态培养大多基于经验数据和操作经验，易污染杂菌；3、液体 深层发酵，以获得最佳操作条件在较短时间内生产大量的菌丝体和代谢产物， 优点是：可以进行工业化连续生产，培养原料来源广泛，通过控制发酵装置 达到最佳培养条件，周期短效率高；缺点是菌丝体的生产量低，难以形成大 规模应用。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提出一种药用猴头菌菌丝体固体液体混合 培养的方法，该方法能生产出质量更好的药用猴头菌菌丝体，方法更完善。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种药用猴头菌菌 丝体的固液培养基培养方法，包括以下步骤：下述物质的百分数均为重量百 分数，

(1).配制固体培养基

加入余量的水，pH值6～7.5，混合均匀，118～121℃灭菌，25～30分 钟；

(2).菌种的优化筛选及子实体分离：

采选中条山原始森林中的野生猴头菇中生长强壮、发育良好、没有病虫 害、种子没散落的子实体；

在接种室100级以上超净工作台内，将猴头菇子实体浸入75％的酒精中 消毒1～2分钟，取出后用蒸馏水冲洗干净，再用消毒纱布擦干，将子实体放 在培养皿上，用钟形罩或类似用具覆盖，室温保持在18～20℃，使子实体缓 慢生长，过2～3天后，种子即散出来，落入装有步骤(1)培养基的培养皿中， 然后用镊子蘸取落下的种子，用划线法接种于试管的斜面上培养，在22～ 25℃下培养4～5天种子即会萌发，待菌丝基本长满斜面时，选择色白、基内 菌丝发达粗壮、菌束明显的，置入摇床瓶接种备用；

(3).菌种的培养

接种前，接种口应先用常规方法消毒，即用75％酒精浸泡过的脱脂棉球 擦试，后开启臭氧发生器，使其出风口始终对着接种口，在接种口周围形成 一个局部无菌区，然后用消过毒的无毒橡胶管套于接种管口上，将经过孢子 分离的摇床瓶菌种接入装有步骤(1)培养基的罐内，接种量为9％～11％，全部 过程均在无菌条件下进行，接种后开搅拌机，搅拌速度200转/分，恒温25℃， 培养2天；

(4).液体深层培养：

4.1种子罐培养基为：

加入余量的水，118～121℃灭菌28～32分；

4.2将步骤(3)培养好的菌种接种至种子罐，25～27℃，培养3～4天， 至结果为：

①.镜检：菌丝呈树枝状，无杂菌；

②.外观：液体中有较多的白球状粒；

(5).菌丝体培养：

麸皮35～40％，甘草药渣15～20％，延胡索药渣7～10％，玉米面7～10％， 谷糠7～10％，玉米棒3～5％，木屑3～5％；加水混匀，再加入总量的1％的石 膏，搅拌均匀，分装在聚丙烯小袋中，118～121℃灭菌115～120分钟，在 100级无菌区中接入步骤4.2的固体菌种，接种量为1/30，前12天26～28℃， 后28天在23～25℃中培养，待菌丝生长满后掰块55～65℃烘干，即得猴头 菌丝体。