[发明专利]转BAR基因农作物的可视化检测方法有效
| 申请号： | 201210332675.7 | 申请日： | 2012-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN102787175A | 公开（公告）日： | 2012-11-21 |
| 发明（设计）人： | 唐卓;余懋群;陈蓉;龙海 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | bar 基因 农作物 可视化 检测 方法 | ||
1.一种转BAR基因农作物的PCR可视化检测方法，其特征在于，所述方法是利用在PCR体系中加入DNAzyme标记的检测BAR基因的特异性探针，用正反引物对BAR基因进行扩增，利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性将探针中的DNAzyme标记释放通过检测PCR产物中释放出的标记物来判断该样品是否为转基因样品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测BAR基因的探针是：CCCTACCCAGTTCCTGCGGCTCGGTACGGAAGTTGACCTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAA-N H2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR反应中特异性的引物是：
BAR-2：GCACCATCGTCAACCACTACATC
BAR-6：GAGGTCGTCCGTCCACTC。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：
1)DNA的提取；
2)PCR反应；
3)显色反应。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR反应体系及条件：
95℃3分钟；94℃30秒，60℃1分钟30秒，循环35-40次；72℃延伸5分钟，得扩增样品。
6.根据权利要求1所述PCR产物中释放出的DNAzyme标记物，其特征在于，该标记物是与卟啉铁等结合具有过氧化物酶活性DNAzyme，可在PCR反应结束后，加入hemin、显色底物(ABTS、DAB等)、H2O2，在室温下显色，直接用肉眼观察颜色变化从而判断该样品是否为转基因。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所检测对象为转BAR基因的农作物，包括水稻、小麦、棉花等。
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