[发明专利]用于实时PCR多重分析的系统和方法

权利要求书

1.一种定量样品中核酸靶标的量的方法，该方法包括：

(a)在腔室中合并含有所述核酸靶标的样品、用于引发所述核酸靶标扩增的引物对、标记试剂以及与所述核酸靶标互补的探针，其中所述探针固定于磁珠上；

(b)进行扩增循环，以形成用所述引物对扩增的所述核酸靶标的扩增产物；

(c)将所述扩增产物与所述探针组进行杂交；

(d)向所述腔室表面施加磁场，用以将所述磁珠、与固定于该磁珠上之探针杂交的所述扩增产物以及与所述扩增产物缔合的任何标记试剂吸引至所述腔室表面；

(e)检测来自所述标记试剂的信号；

(f)从所述腔室表面撤走磁场，之后进行下一扩增循环；

(g)重复步骤(b)至(f)至少直到所述信号能区别于背景噪声；以及

(h)通过将所述信号与所述样品中核酸靶标的量建立关联来定量该样品中核酸靶标的量。

2.权利要求1的方法，其中定量所述样品中核酸靶标的量包括确定所述核酸靶标的绝对量。

3.权利要求1的方法，其中定量所述样品中核酸靶标的量包括确定所述核酸靶标的相对量。

4.权利要求1的方法，其中将所述信号与所述样品中核酸靶标的量建立关联包括：

(a)将所述信号对扩增循环数作图；以及

(b)将所述信号对扩增循环数的图与标准曲线进行比较，该标准曲线通过已知量之所述核酸靶标的连续稀释的实时PCR得到。

5.权利要求1的方法，其中所述信号是荧光信号。

6.权利要求5的方法，其还包括测定来自多个所述磁珠的荧光信号的中值荧光强度(MFI)。

7.权利要求6的方法，其包括测定来自约100个所述磁珠的荧光信号的MFI。

8.权利要求1的方法，其中所述磁珠是经编码磁珠。

9.权利要求8的方法，其中所述经编码磁珠用具有不同发射波长或不同荧光强度或兼具二者的荧光染料进行编码。

10.权利要求8的方法，其还包括检测来自经所述荧光染料编码之磁珠的荧光信号。

11.权利要求8的方法，其还包括在所述腔室中合并阴性对照磁珠。

12.权利要求11的方法，其还包括测定来自多个所述经编码磁珠的荧光信号的中值荧光强度(MFI)；以及测定来自多个所述阴性对照珠的荧光信号的中值荧光强度(MFI)。

13.权利要求12的方法，其进一步从所述经编码磁珠的MFI减去所述阴性对照珠的MFI。

14.权利要求1的方法，其中所述磁珠是超顺磁性的。

15.权利要求1的方法，其中步骤(b)至(f)被重复10～40次。

16.权利要求1的方法，其中所述探针包含经封闭的3’羟基。

17.权利要求1的方法，其中所述标记试剂与固定于所述磁珠上的所述探针结合。

18.权利要求17的方法，其中所述探针是分子信标探针。

19.权利要求1的方法，其中所述标记试剂与互补于所述核酸靶标的第二探针结合，其中所述第二探针不固定在所述磁珠上，并且其中所述第二探针和所述经固定探针与所述核酸靶标上的不同区域互补。

20.权利要求1的方法，其中所述标记试剂与所述引物对中的一种引物结合。

21.权利要求1的方法，其中所述标记试剂是荧光团。

22.权利要求1的方法，其中所述标记试剂是成对的荧光团和猝灭剂。

23.权利要求1的方法，其中所述标记试剂是荧光共振能转移对。

24.权利要求1的方法，其中所述标记试剂是DNA嵌入剂。

25.权利要求1的方法，其中所述样品包含多种核酸靶标。