[发明专利]一种检测UGT1A1基因型的引物和探针、及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因型的检测，具体讲，涉及一种检测UGT1A1基因型的引物和探针、及其试剂盒。

背景技术

个体化治疗是基于药物基因组Pharmaco-genomics发展起来的，在肿瘤治疗中扮演越来越重要的角色。个体化治疗是指通过检测肿瘤的靶标或患者的遗传因素，了解患者对药物敏感性及耐受性，从而指导合理用药、提高用药的安全性和有效性、避免不良反应、减少药物治疗的费用和风险。简而言之，个体化治疗的目标就是：在合适的时间，对合适的人，使用合适的药物，处方合适的剂量。

伊立替康(Irinotecan，CPT-11，商品名为开普拓、Camptosar)，是DNA拓扑异构酶I抑制剂，可诱导单链DNA损伤，从而阻断DNA复制叉，阻止DNA链的重新组装，引起DNA双链的断裂，造成细胞死亡。伊立替康主要用于治疗成人晚期/转移性大肠癌，对小细胞和非小细胞肺癌及宫颈癌和卵巢癌亦有疗效。伊立替康最主要的毒副作用为嗜中性白血球减少症及迟发性腹泻，后者为剂量限制性毒副反应，严重时可致命。临床研究表明，40％以上接受伊立替康治疗的患者可出现3～4级迟发性腹泻，约10％患者可出现嗜中性白血球减少症，从而导致化疗方案的提前中止。

伊立替康为前体药物，在体内经过羧酸酯酶转化为活性代谢物。羧酸酯酶将伊立替康分子10位的哌啶侧链裂解，产生7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)，其活性较伊立替康强100到1000倍。SN-38经肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-GT，主要由UGT1A1、UGT1A7和UGT1A9代谢)葡萄糖醛酸化灭活，生成葡萄糖醛酸化SN-38(SN-38G)，从而保护健康细胞免受伊立替康毒性的影响。

UGT1A1基因编码尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶，其多态性最常发生在TATA启动子区，表现为易变的TA重复。野生启动子序列有6个TA重复(TA)₆，也被称为UGT1A1*1，三个变异等位基因分别为5、7、8三种TA重复——(TA)₅、(TA)₇、(TA)₈。其中(TA)₇多态性(也叫UGT1A1*28)最常见，(TA)₅和(TA)₈多态性少见。突变型UGT1A1*28的杂合子比野生型对SN-38的葡萄糖醛苷化活性稍低，而UGT1A1*28的突变纯合子对SN-38的葡萄糖醛苷化活性则仅是野生型的35％，从而更容易产生毒副作用。野生型UGT1A1(6/6)在接受伊立替康治疗时产生毒副作用风险较低，而UGT1A1*28突变型杂合子(6/7)产生毒副作用的几率为12.5％，突变型纯合子(7/7)则有50％产生毒副作用的可能性。该突变的影响是与剂量相关的，在使用低剂量伊立替康治疗时，UGT1A1突变与否对毒副作用的风险影响大。

因此，2005年，美国FDA要求在伊立替康药品标签上加入警示，建议患者在使用伊立替康前先检测是否带有UGT1A1*28突变。在中国人中，野生型纯合子(6/6)、杂合子(6/7)和突变型纯合子(7/7)的发生频率分别为70.2％、27.7％和2.1％。

为此，发明人根据我国人口突变特点，设计并制造了一种检测UGT1A1基因型的引物和探针、及其试剂盒。

发明内容

本发明涉及一种检测UGT1A1基因型的引物和探针、试剂盒。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种检测UGT1A1基因型的引物，其中，所述引物的核苷酸序列为：上游引物为5’端连接Fam基团的SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列，下游引物为由SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列。

本发明还涉及一种含有述检测UGT1A1基因型的引物的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括核酸扩增试剂、PCR对照品、Genscan对照品；其中，核酸扩增试剂为：

表1：