[发明专利]一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法

权利要求书

1.一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，按以下步骤进行：

1）初提

用缓冲液将生鲜乳稀释1～5倍，或用缓冲液将乳粉稀释5～15倍，用正己烷或乙醚—石油醚混合溶液去除脂类；接着采用超滤膜以及离心或抽滤的方式去除乳与乳制品中的高分子蛋白和其他颗粒物，得到低分子肽初提取液；乙醚—石油醚混合溶液中，乙醚的体积比例为30%～70%，其余是石油醚；

2）初净化

将上述初提取液经过C18反相固相萃取柱的萃取；接着先用1%—5%的甲醇溶液或乙腈溶液洗去前述萃取柱上的强极性的杂质，然后用40%—70%的甲醇洗脱溶液或乙腈洗脱溶液将前述萃取柱上的低分子肽洗脱下来，收集洗脱溶液；最后蒸发掉洗脱溶液中的甲醇或乙腈，剩下的溶液即为低分子肽初净化液；

3）再净化

用盐酸或硫酸或甲酸或乙酸溶液将获得的初净化液pH值调到2～4以内，以使低分子肽上的氨基“—NH₂”带上H⁺变为“—NH₃⁺”；接着将前述溶液通过带有负电荷基团的阳离子交换固相萃取小柱，以将低分子肽吸附并富集在该固相树脂上；随后，依次用酸性、中性洗涤液将不带电荷的有机小分子物质和杂质洗涤掉，再用氨水甲醇溶液洗脱固相树脂，使低分子肽上的“-NH₃⁺”重新成为不带电荷的“-NH₂”状态，并随氨水甲醇溶液洗脱下来，收集洗脱液；

4）蒸发

洗脱液经过低温氮吹至净干，得到高纯度的低分子肽混合物。

2.根据权利要求1所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步骤1）中的缓冲液是磷酸盐缓冲液（PBS），或者是柠檬酸缓冲液，或者是NaCl溶液。

3.根据权利要求2所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述超滤膜是截留分子量为5K的超滤膜。

4.根据权利要求3所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中的甲醇洗脱溶液的成分为甲醇和水，其中甲醇的体积含量为40%～70%。

5.根据权利要求4所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中的乙腈洗脱溶液的成分为乙腈和水，其中乙腈的体积含量为40%～70%。

6.根据权利要求5所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步骤3）中的酸性洗涤液为磷酸盐缓冲液（PBS），或者是柠檬酸盐缓冲液，或者是NaCl溶液，用盐酸或硫酸或甲酸或乙酸溶液将其pH值调至2～4以内；

所述步骤3）中的中性洗涤液为磷酸盐缓冲液（PBS），或者是柠檬酸盐缓冲液，或者是NaCl溶液，pH在6.5～7.5以内。

7.根据权利要求6所述的一种乳及乳制品中低分子肽的提取方法，其特征在于：所述步骤3）中的氨水甲醇溶液的成分为甲醇和氨水，其中氨水的体积含量为2%～5%。