[发明专利]一种从萝卜发酵液中分离花色苷色素和乳酸的方法

权利要求书

1.一种从萝卜中同时提取萝卜花色苷色素和乳酸的方法，包括如下步骤：

(1)菌种活化扩培

乳酸菌的活化：将购买于中国科学院微生物研究所，菌号为CICC22696的冷冻植物乳杆菌的菌种解冻后，接种到300mL土豆培养基上，在30℃培养18～24h得富含活化菌种的土豆培养基；

乳酸菌的扩培：将所述富含活化菌种的土豆培养基扩培到新的土豆培养基中，在30℃培养18-24h即可用于萝卜接种；

(2)预处理、发酵

将萝卜洗净、削皮，然后在95～100℃水中烫漂3～7min进行灭酶，加热后迅速冷却到10～20℃；灭酶后的萝卜皮和8g/100mL的无菌盐水按照3g∶6～7ml的质量体积比装入已灭菌的发酵罐中；接着，按体积比5％，将扩培后的植物乳杆菌接种到发酵罐里；

(3)发酵终止

发酵7～14天后，收集发酵液，并进行高温灭菌处理；

(4)初步纯化

将灭菌后的发酵液离心，收集上清液；

(5)萝卜花色苷色素和乳酸的分离

用6mol/L的盐酸将所述(4)中上清液pH值调整到pH＜3得到酸化的上清液，然后利用高分子填充材料层析柱分离色素和乳酸，加样顺序依次为：所述酸化的上清液、含0.01％(v/v)盐酸的去离子水、含0.01％(v/v)盐酸的乙醇水溶液，分别收集洗脱液：乙醇收集液(A)富含色素物质，其它收集液(B)富含乳酸物质，所述乙醇水溶液的浓度为80～100％(v/v)；

(6)萝卜花色苷色素和乳酸的精制

将所述乙醇收集液(A)离心，收集上清液，真空浓缩至体积小于原有体积的四分之一，再进行离心，收集上清液，加入乙醇或乙醇水溶液，使最终乙醇浓度大于80％(v/v)，进行醇沉、离心、蒸发浓缩至体积小于原有体积的四分之一，如此反复1～4次，然后蒸干得到暗红色粉末即所述萝卜花色苷色素；将所述其它收集液(B)进行浓缩、离心，收集上清液，然后用乙醇进行醇沉，离心，收集上清液，再进行浓缩至除去所有乙醇，即得到纯化的乳酸浓缩液，通过真空干燥或冷冻干燥得到粉末物质即所述乳酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述(1)中所述300mL土豆培养基上接种量为2～3环，所述富含活化菌种的土豆培养基与所述新的土豆培养基的体积比为5％。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述土豆培养基制作方法为：煮沸500mL水，然后称取洗净并切好的土豆块120g，煮沸并保温30分钟，然后进行过滤，再加入12g白砂糖，将滤液分装入两个锥形瓶，每个用去离子水定量到300mL；然后用包有纱布的橡皮塞封住瓶口，再用报纸包裹起来，并用橡皮筋捆好，放入灭菌锅灭菌2小时左右。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述(2)中萝卜烫漂灭酶时间为3min。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述(2)中，所述萝卜皮和所述8g/100mL的无菌盐水按照3g∶7ml的比例装入已灭菌的发酵罐中。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述(5)中所述高分子填充材料为大孔吸附树脂或C18树脂。

7.如权利要求1所述的方法，其中，所述离心条件为：10000g，4℃，5～10min。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述大孔吸附树脂为XAD-7HP。

9.如权利要求6所述的方法，其中，所述C18树脂为Lichrospher反相RP-18填料。