[发明专利]利用小干扰RNA抑制病毒基因表达

说明书

本申请是申请日为2006年6月1日的、发明名称为“利用小干扰RNA抑制病毒基因表达”的中国专利申请200680041845.9(PCT/US2006/021253)的分案申请。

相关申请的交互参考

本申请要求于2005年9月12日递交的PCT申请PCT/US2005/032768的权利，该PCT申请根据美国法典第35卷第119条（35U.S.C.§119）要求2004年9月10日递交的美国临时申请号60/608,574的优先权，这两者都以其整体并入本文作为参考。

关于联邦资助的研究或开发的声明

本发明在研究阶段部分地是在美国国立健康研究院（National Institutes of Health）的基金号为5R43AI056611的基金资助下完成的。美国政府享有本发明的一定权利。

发明领域

本发明涉及用小干扰RNA（shRNA和siRNA）抑制病毒基因表达，例如丙型肝炎IRES介导的基因表达。

发明背景

丙型肝炎病毒（HCV）感染的治疗和预防仍然是控制这个世界范围内健康问题的主要挑战；现有的治疗仅部分有效并且目前还没有疫苗。丙型肝炎（HCV）病毒在世界范围内感染了超过1亿7千万人，并且是造成肝移植的主要原因。包括三氮唑核苷和聚乙二醇化干扰素α的现有治疗仅在大约50％的患者中有效，并且伴有大量副作用。缺乏优良的小动物模型、不能在组织培养细胞中稳定培养病毒和高病毒突变率制约着更有效的HCV治疗的开发^[1-3]。HCV复制子系统的可获得性使得对HCV复制、宿主-细胞相互作用和抗病毒剂评估的研究成为可能，并且更近来开发了转基因的嵌合人源化小鼠肝模型，其使得能进行完全HCV感染^[4－7]。另外，通过利用HCV IRES依赖性报道基因系统的体内成像，已经在小鼠中促进了在多个时间点上对小鼠肝中抗HCV试剂的运送和抑制作用的有效评估^[8]。

RNA干扰是导致基因表达下调的进化上保守的途径。合成的大约19－29个碱基对的短干扰RNA（siRNA）能有效地抑制哺乳动物细胞和动物中的基因表达而不激发免疫反应，这个发现引起将这些抑制剂开发成治疗剂的热潮^[9]。siRNA的化学稳定化导致血清半衰期增加^[10]，说明如果能克服运送问题的话，静脉内施用可能会获得积极的治疗效果。此外，小发夹RNA（shRNA）也显示对于哺乳动物细胞内的靶基因的强抑制作用，并且能易于由噬菌体（例如T7、T3或SP6）或哺乳动物（pol III例如U6或H1或polII）启动子表达，这使得它们成为用于病毒运送的极好的候选者^[11]。

因为现有治疗不完全有效（在[4，12]中综述），所以已经尝试发现抗HCV的有效的基于核酸的抑制剂。这些努力包括传统的反义寡核苷酸、磷酰二胺吗啉寡聚物(phosphorodiamidate morpholino oligomer)^[8]、核酶及较近的siRNA。已经表明siRNA能有效地靶向人组织培养细胞^[13-19]和动物系统^[20]中的HCV。

发明概述

本发明提供用于抑制病毒（例如丙型肝炎病毒（HCV））中IRES介导的基因表达的方法、组合物和试剂盒。