[发明专利]肝素钠的共振光散射检测方法

权利要求书

1.肝素钠的共振光散射检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a．标准曲线的制作

a1．在反应容器中加入Co(II)的水溶液和钴试剂的无水乙醇溶液，混匀，再加入NaOH的水溶液，混匀，再加入肝素钠的水溶液，用水稀释制成含有2.0×10^-5 mol/L Co(II)、4.0×10^-5 mol/L 钴试剂、0.042 mol/L NaOH和肝素钠浓度在0.05~1.60 μg/mL范围内呈梯度的系列标准溶液；

a2．按照步骤a1所述方法配制不加入肝素钠的空白对照溶液；

a3．取步骤a1配制的系列标准溶液，用荧光分光光度计在220-700 nm范围内、激发波长等于发射波长、狭缝10 nm的条件下进行同步扫描，获得共振光散射光谱，测定550nm处的散射强度，记为I；另取步骤a2配制的空白对照溶液，同法测定550nm处的散射强度，记为I₀；按照公式△I₅₅₀= I-I₀计算△I₅₅₀，制作△I₅₅₀对肝素钠浓度的标准曲线；

b．样品测定

b1．在反应容器中加入Co(II)的水溶液和钴试剂的无水乙醇溶液，混匀，再加入NaOH的水溶液，混匀，再加入未知肝素钠含量的样品的水溶液，用水稀释制成含有2.0×10^-5 mol/L Co(II)、4.0×10^-5 mol/L 钴试剂、0.042 mol/L NaOH和未知肝素钠浓度的待测溶液；

b2．按照步骤b1所述方法配制不加入肝素钠的空白对照溶液；

b3．取步骤b1配制的待测溶液，用荧光分光光度计在220-700 nm范围内、激发波长等于发射波长、狭缝10 nm的条件下进行同步扫描，获得共振光散射光谱，测定550nm处的散射强度，记为I；另取步骤b2配制的空白对照溶液，同法测定550nm处的散射强度，记为I₀；按照公式△I₅₅₀= I-I₀计算△I₅₅₀，再依据步骤a3获得的△I₅₅₀对肝素钠浓度的标准曲线，计算出样品中肝素钠的含量。

2.根据权利要求1所述的肝素钠的共振光散射检测方法，其特征在于，所述步骤a1是在反应容器中加入1.0 mL 2.0×10^-4 mol/L CoCl₂水溶液和0.8 mL 5.0×10^-4 mol/L 钴试剂无水乙醇溶液，混匀，再加入1.4 mL 0.3 mol/L NaOH水溶液，混匀，再加入10 μg/mL肝素钠水溶液，用水稀释至10 mL，制成含有2.0×10^-5 mol/L Co(II)、4.0×10^-5 mol/L 钴试剂、0.042 mol/L NaOH和肝素钠浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 μg/mL的系列标准溶液；

所述步骤b1是在反应容器中加入1.0 mL 2.0×10^-4 mol/L CoCl₂水溶液和0.8 mL 5.0×10^-4 mol/L 钴试剂无水乙醇溶液，混匀，再加入1.4 mL 0.3 mol/L NaOH水溶液，混匀，再加入未知肝素钠含量的样品水溶液，用水稀释至10 mL，制成含有2.0×10^-5 mol/L Co(II)、4.0×10^-5 mol/L 钴试剂、0.042 mol/L NaOH和未知肝素钠浓度的待测溶液。