[发明专利]心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽及其抗体和应用

说明书

 

技术领域

本发明涉及医学检测领域，特别涉及心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，还涉及由该表位肽的制备的单克隆抗体及其应用。

背景技术

心血管疾病是严重威胁人类生命和健康的重要疾病，已成为21世纪人类健康的头号杀手。全球每年有1750万人死于心脏病和其他心血管疾病，约占全球死亡人数的1/3，预计到2020年这个数字将突破2500万，届时心血管疾病将成为人类死亡和致残的首要原因。急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是心血管疾病的主要类型，发病突然，急性期死亡率约为30%。在我国，急性心肌梗死的发病率呈明显上升趋势，正成为我国心血管领域的重要公共卫生问题。因此，AMI的早期诊断和治疗监测非常重要。

寻找AMI的高特异性、高灵敏度的早期诊断标志物是临床亟待解决的热点问题。对AMI早期正确诊断，以便进行及时有效的治疗，是改善预后、降低AMI急性期病死率提高患者生存率的关键。临床上虽然可以通过患者的临床表现、心电图对典型AMI病例进行有效诊断及预后判断，但是对一些非典型病例仍然需要通过心肌损伤标志物的检测进行早期诊断。目前，用于诊断AMI的指标主要有肌酸激酶同工酶MB (creatine kinase isoenzyme MB，CK-MB)、心肌肌钙蛋白T ( cardiac troponin T，cTnT)、心肌肌钙蛋白I ( cardiac troponin I，cTn I)和肌红蛋白（Myoglobin，Mb）等，但它们对于早期诊断AMI均不够理想，主要原因是CK-MB、肌钙蛋白I、肌钙蛋白T缺乏足够的敏感性(胸痛后4~8小时后浓度才上升)。而肌红蛋白早期敏感性虽高(胸痛后2~3小时浓度上升)，但特异性较差，不能区分骨骼肌损伤和心肌损伤，也不是一个理想的早期诊断指标。

心脏型脂肪酸结合蛋白（heart type fatty acid-binding protein，H-FABP）是存在于心肌细胞胞质内的小分子可溶性蛋白质，分子质量约为15KD， 其作用是与细胞内长链脂肪酸结合， 促进细胞内长链脂肪酸转运，将其转运至线粒体，进入线粒体后参加β氧化，并最终生成ATP， 后者是心肌收缩的主要能量来源。经研究发现H-FABP对于AMI的早期诊断更具有特异性和敏感性，有望成为理想的早期诊断AMI的生化指标。新近发现，H-FABP可弥补CK -MB、cTnI和Mb检测的不足，对于AMI的早期诊断更具有特异性和敏感性，有望成为理想的AMI的早期诊断生化指标。主要是由于H-FABP具备以下特点：①心肌特异性高：大量地存在于心肌组织中，在心肌中比骨骼肌高10倍，在肾脏、肝脏、小肠中水平很低；②敏感性高：由于H-FABP的相对分子质量小，当心肌细胞缺血时，H-FABP可快速从心肌细胞释放，并迅速进入到血液中，在心肌损伤发生20分钟内可被检测到，3～4 小时内可检测到其峰值，20-24小时后回到正常值。而且，H-FABP在AMI发生3 小时内的敏感度显著高于肌红蛋白(72. 3 % Vs 57. 4 %)。上述特点表明，H-FABP对早期诊断和排除AM I是一个有用的生化标志物，是早期检测心肌损伤的理想指标。目前，对于H-FABP的B细胞表位肽未见相关报道。

发明内容

 本发明的目的之一在于提供心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，与载体蛋白交联后能够刺激免疫体统产生免疫反应，制备成杂交瘤细胞株后能产生单克隆抗体。

为实现上述发明目的，技术方案为：

心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽，所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明的目的之二在于提供心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物，技术方案为：

含有权利要求1所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物，所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物为N端引入半胱氨酸的心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽与载体蛋白的交联体。

优选的，所述载体蛋白为血蓝蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。

本发明的目的之三在于提供由心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物制备的杂交瘤细胞株，技术方案为：

所述心脏型脂肪酸结合蛋白B细胞表位肽的衍生物制备的杂交瘤细胞株。

优选的，所述杂交瘤细胞株的生物保藏号为CCTCC NO：C201269。

本发明的目的之四在于提供杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体，技术方案为：

所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。