[发明专利]一种细菌脂多糖的沉降方法

说明书

技术领域

本发明涉及细菌脂多糖的沉降方法，属于生物制品领域。

背景技术

G^-细菌在自然界广泛存在，能从水、土壤、动植物及人体中分离出G^-细菌。细菌脂多糖（LPS）是G^-细菌外膜的组成成分，其是由脂质A、核心多糖和O-侧链三部分组成。LPS会引起广谱非特异性的病理生理反应，比如发烧、白细胞数变化、弥散性血管内凝血、低血压、休克或者死亡，其抗原性很强，极小剂量的内毒素即可导致大部分动物死亡，因此，人用药物尤其是注射制剂需要对内毒素（热原质）限量，例如葡萄糖注射液、白蛋白、球蛋白、细胞因子、多糖类疫苗、蛋白类疫苗均要对产品进行热原质检测并控制在一定水平，超限热原质必须从产品中除去。另一方面，LPS是重要的保护性抗原，在各种动物模型中，LPS抗原表现出良好的免疫原性和免疫保护作用，可以将纯化的LPS制作成为疫苗，预防疾病发生。

从含有LPS的溶液中除去或者纯化细菌脂多糖的方法包括化学纯化方法和物理分离方法，化学纯化是用乙醇、核酸酶、蛋白酶、丙酮等化学试剂纯化，成本高且污染环境。

物理分离方法主要是超速离心分离方法，如，周炳荣等，“细菌内毒素（脂多糖）提取及纯化技术”，药用微生物学，药学情报通讯1989年第7卷第1期中LPS纯化方法即采用最常用的超速离心（4万转×4小时，共三次），在这一条件下，LPS可沉淀下去，而蛋白质、核酸多糖则保留在上清液中，除去上清液即可得到较为纯化的LPS，经计算，4万转应大于15万g。超速离心的方法可以克服化学纯化方法的缺陷，但是因为超速离心的离心力大，通常大于100,000g，离心时间长，通常大于10h，处理量小,并且，现有技术中，离心力大于100000g的离心机的价格会显著高于离心力低于100000g的离心机，导致生产成本高，难以大规模工业应用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的物理方式沉降细菌脂多糖的方法。

本发明细菌脂多糖的沉降方法，它包括如下步骤：

（1）取含有细菌脂多糖的溶液，冷冻至完全凝固，解冻；

（2）将步骤（1）处理后的溶液离心，得到的沉淀，即为细菌脂多糖。

其中，步骤（1）所述冷冻的温度为-10℃～-80℃。优选地，所述冷冻的温度为-20℃~-40℃。

其中，步骤（1）所述解冻的温度大于0℃且小于80℃。优选地，所述解冻的温度大于0℃且小于等于70℃，可以保证蛋白制品不会失活。

其中，步骤（2）所述离心条件是，离心力为1000~30000g，离心时间大于10min。优选地，所述离心力为6000g，离心时间为30~60min。

其中，所述含有细菌脂多糖的溶液是细菌脂多糖提取液，或者污染细菌脂多糖的生物制品或药品。

生物制品是指用基因工程、细胞工程、发酵工程等生物学技术制成的免疫制剂或有生物活性的制剂。

所述细菌脂多糖提取液可以采用细菌脂多糖提取液的常用提取方法提取，如，采用三氯醋酸法、酚水法、高压超声处理法或者DMSO法。其中,DMSO是二甲基亚砜。

所述污染细菌脂多糖的生物制品是疫苗、抗毒素、血清、免疫球蛋白、凝血因子、生长因子、干扰素或者白蛋白。

本发明细菌脂多糖的沉降方法，先对细菌脂多糖的溶液进行冷冻和解冻后，仅需低速离心即可达到分离细菌脂多糖的目的，克服了传统物理分离细菌脂多糖需超速离心的缺陷，成本低廉，操作方便，具有良好的工业应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明细菌脂多糖的沉降方法

取三氯醋酸法提取的细菌脂多糖提取液，-80℃下冷冻，10℃解冻，2000g离心60min，所得沉淀即为细菌脂多糖。

实施例2本发明细菌脂多糖的沉降方法

取酚水法提取的细菌脂多糖提取液，-10℃下冷冻，70℃解冻，30000g离心10min，所得沉淀即为细菌脂多糖。

实施例3本发明细菌脂多糖的沉降方法

取被LPS污染的人血白蛋白，-20℃下冷冻，50℃解冻，6000g离心30min，沉淀即为除掉的细菌脂多糖。