[发明专利]KLK3基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种KLK3基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

血管舒缓素相关肽酶3（kallikrein-related peptidase3，KLK3），也被称作前列腺特异抗原(prostate-specific antigen，PSA)，KLK3基因位于19q13.2-q13.4，基因全长6KB，含有5个外显子和4个内含子，转录后的mRNA全长1446bp，转录受雄激素调节。KLK3基因是人类组织激肽释放酶基因(KLK)家族成员，是临床上广泛用于筛选、诊断前列腺癌的肿瘤标志物。目前发现PSA在多种组织和体液中表达，精浆中的浓度最丰富。因为PSA具有丝氨酸蛋白酶和类胰凝乳酶活性，特异性降解精浆中的丝氨酸蛋白酶样和糜蛋白酶的特异性底物—精囊蛋白（semenogelin）和纤维连接蛋白（fibronectin），液化精浆凝块，增加精子的活动力，而且PSA通过其激肽释放酶作用使精液中缓激肽或缓激肽样代谢物增加，缓激肽或缓激肽样物质能诱导平滑肌收缩，使精子活力增加，有利于受精。

目前，KLK3基因突变检测方法主要有：Illumina光纤微珠芯片技术、SNPlex Genotyping System和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，SNPlexTM System技术对SNP序列特异性要求较高,不能随意地分型所选择的SNPs,难以应用于临床检测诊断，而且该方法操作比较复杂，不能满足实际应用的需要。荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，同样不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供KLK3基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测KLK3基因五种常见基因型G11453A、G7670A、A9367C、T536C和A15G的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下。

一种KLK3基因突变检测液相芯片，包括有：

（A）.针对KLK3基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对G11453A位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12，针对G7670A位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14，针对A9367C位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16，针对T536C位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18；和/或针对A15G位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10；

（B）.有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30，且所述anti-tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；

（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中一个实施例中，所述扩增引物为：针对G11453A位点的SEQ ID NO.31及SEQ ID NO.32，针对G7670A位点的SEQ ID NO.33及SEQ ID NO.34，针对A9367C位点的SEQ ID NO.35及SEQ ID NO.36，针对T536C位点的SEQ ID NO.37及SEQ ID NO.38；和/或针对A15G位点的SEQ ID NO.39及SEQ ID NO.40。