[发明专利]一种雷公藤有效成分的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化工产品的分离方法，具体是分离雷公藤中有效成分的方法。

技术背景

卫矛科雷公藤属植物在我国就有10个种，而用于药用的主要有3种：即雷公藤、昆明山海棠(又称粉背雷公藤)和东北雷公藤(又称黑蔓)。雷公藤又称水莽草、黄药、黄藤、菜虫药、断肠草[全国高等植物图鉴，第二册，科学出版社，1982，2686]。雷公藤具有多种药理作用，如：清热解毒、祛风除湿、舒筋活血通络、消肿止痛、杀虫止痒；已用于多种疾病的治疗，如：类风湿性关节炎、某些皮肤病、肾炎、肝炎，有一定的抗肿瘤和抗生育作用，还具有潜在的抗HIV活性[Hongquan Huan et al.Sesquiterpene alkaloids from Tripterygium hypoglaucum and Tripterygium wilfordii：a new class of potent anti-HIV agent.Journal of Natural products.2000，63(3)：357-361]。因此，雷公藤中有效成分分离提纯技术的研究对未来新药的研发具有深远的影响。

目前国内文献报道的对雷公藤的有效成分分离纯化方法主要有：醇提水沉法、水提醇沉法、醇提有机溶剂萃取法[陈俊元等，中国医药工业杂志，1989，5，195-200]。通过比较研究得出的初步结论是，水提醇沉法与醇提水沉法相比提取率相近但是降低了成本，醇提有机溶剂萃取法和前两种工艺相比萃取率最好，但是直接用有机溶剂萃取乳化严重，处理麻烦，难以进行工业生产[李汉堡等，中成药，1991，10，1-4]。上述三种方法都存在如下问题：工艺复杂、物耗过大、收得率低，而且大量使用有毒有害的试剂，如氯仿、乙醚、丙酮等。曾有利用磷酸二氢钠水溶液与乙醇形成双水相，然后用水不溶性溶剂进行三相萃取富集雷公藤有效成分[肖世基等，广西大学学报，2011，3，496-499]。但所用无机盐的回收比较麻烦。而采用聚合物-无机盐水溶液-乙醇-有机溶剂三相萃取法则可以降低无机盐用量，同时聚合物可以通过超滤膜过滤回收，且聚合物与浸膏中的成分存在一定的相互作用，使得萃取可以以一定的选择性进行。其工艺是将雷公藤根干粉用醇提取，得到提取液，浓缩后得浸膏。将浸膏分散于聚合物-无机盐水溶液-乙醇-水不溶性有机溶剂三相系统中，进行选择性萃取，分离出上层有机相，浓缩有机相得到有效部位，然后将得到的有效部位用醇溶解加水分步结晶除去大部分非有效物质得有效成分部位。有效成分部位用高速逆流色谱分离得到雷公藤红素，用硅胶柱层析分离得到雷公藤甲素。

发明内容

本发明是将雷公藤醇提物用三相萃取分离方法得到雷公藤的有效部位，萃取充分且不产生乳化现象，缩短分离时间。然后用适当的有机溶剂溶解除去不溶物，再分步结晶除去非有效成分。最后将富集得到的雷公藤有效部位用高速逆流色谱进行分离，得到纯度95％的雷公藤红素(tripterine)，用硅胶柱层析分离得到98％的雷公藤甲素(triptolide)。

本发明分离纯化包括以下方法步骤：

1.雷公藤粗提取物的制备：将雷公藤根粉碎，以2～10倍(w/w)雷公藤干重的醇回流提取1～5次，每次2～5小时，提取液减压浓缩成浸膏；

2.将上述制得的浸膏溶解分配在0.5-5％ PEG-20000、5％～30％硫酸铵水溶液-乙醇双水相体系(PEG-20000-硫酸铵水溶液与乙醇形成等体积的两相体系)中，用石油醚(沸程60-90℃，下同)萃取1～5次，分出石油醚层，浓缩回收。石油醚萃取后余下的双水相再用乙酸乙酯-石油醚混合溶剂(乙酸乙酯体积含量10％～50％)萃取2～10次，萃取液浓缩得浸膏，回收萃取剂可反复使用；

3.将步骤2所得的乙酸乙酯-石油醚萃取浸膏溶于2～10倍质量的乙醇中，过滤除去不溶物，滤液加水沉淀，低温静置24小时，然后过滤，滤液浓缩得到浸膏；

4.将步骤3所得浸膏经高速逆流色谱分离得到高纯度的雷公藤红素。色谱条件：正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水按体积比为1～4∶2～5∶2～5∶1～4充分混合，静置分为两相，分出两相。轻相为固定性，重相为流动相。将步骤3所得浸膏溶解在轻相中，形成0.5-10％的溶液。温度20～40℃，主机转速600～1000r/min，流动相流速1.0～5.0ml/min。紫外检测器检测波长λ＝425nm。组分峰对应流出液经过浓缩，得到雷公藤红素。