[发明专利]一种灵芝水提物的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药品或保健品质量分析方法，具体涉及一种灵芝水提物的质量控制方法。 

背景技术

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss．ex Fr．)Karst．或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang或松杉灵芝Ganoderma tsugae Murr. 的干燥子实体，具有补气安神、止咳平喘等功效。灵芝提取工艺主要有水提与醇提，而多数采用水提工艺，即采用多孔菌科真菌赤芝（Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst.）、紫芝（Ganoderma sinnese Zhao, Xu et Zhang）及松杉灵芝（Ganoderma tsugae  Murr.）的干燥子实体经水提取、浓缩、干燥后制得。故本发明采用灵芝水提物命名。研究表明，灵芝中主要含有多糖、三萜、核苷、生物碱、黄酮、氨基酸及微量元素等多种化学成分。目前，对灵芝药理活性研究主要集中在灵芝多糖和灵芝三萜类成分，因此，灵芝多糖和三萜类成分作为灵芝的最主要功效成分，很有必要对其含量进行测定。

本发明在一系列实验过程中对保健食品原料灵芝水提物标志性成分的测定方法进行了研究。灵芝多糖是灵芝中的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等多种药理活性。目前，某些企业为了达到干燥甚至虚报灵芝多糖含量的目的，常在灵芝水提物中加入糊精、淀粉等各种辅料。若按2010年版中国药典的方法测定，将造成灵芝多糖测定结果偏高。本研究通过水提醇沉法提取灵芝粗多糖，用铜试剂沉淀其中具有葡聚糖结构的多糖，采用紫外分光光度法测定其含量，排除了辅料对测定的影响，为灵芝水提物质量控制提供依据。 

灵芝三萜类化合物是灵芝的另一主要药效成分，由于具有抗癌，抗炎，抗氧化等药理活性而备受关注。本发明人在采用高效液相色谱法对灵芝水提物三萜类成分进行研究中发现，灵芝水提物中含有含量相对较高的灵芝酸A、B、C₂。对比目前常用的比色法测定总三萜含量的方法，特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。 

发明内容

为了有针对性地控制产品质量，本发明采用粗多糖含量和灵芝酸A、B、C₂含量之和作为灵芝水提物的质量控制指标，提供了一种灵芝水提物的质量控制方法。 

本发明采取的技术方案如下： 

以灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C₂含量之和以及粗多糖含量作为灵芝水提物的质量控制指标。

    所述灵芝酸A、B含量的检测方法如下： 

（1）对照品溶液的制备  

取减压干燥至恒重的灵芝酸A、B对照品，加入甲醇制成每1ml含164 μg灵芝酸A和含52 μg灵芝酸B的混标溶液。

（2）供试品溶液的制备  

取灵芝水提物0.5 g，置25 ml容量瓶中，加甲醇适量超声处理10 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

（3）高效液相色谱检测  

以辛烷基键合硅胶为填充剂，乙腈为流动相A，0.1 % 醋酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为22 ℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸A计算，应不低于5000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

所述灵芝酸C₂含量的检测方法如下： 

（1）对照品溶液的制备  

取减压干燥至恒重的灵芝酸C₂对照品，加甲醇制成每1 ml含33μg灵芝酸C₂的对照品溶液。

（2）供试品溶液的制备  

取灵芝水提物0.5 g，置25 ml容量瓶中，加甲醇适量超声处理10 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

（3）高效液相色谱检测  

以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈为流动相A，0.1 % 醋酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为20℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸C₂计算，应不低于5000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

    所述粗多糖含量的检测方法如下： 

（1）标准曲线绘制：