[发明专利]一种灵芝水提物的质量控制方法

权利要求书

1.一种灵芝水提物的质量控制方法，其特征在于：以灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C₂含量之和以及粗多糖含量作为灵芝水提物的质量控制指标。

2.根据权利要求1所述的灵芝水提物的质量控制方法，其特征在于：

所述灵芝酸A、B含量的检测方法如下：

（1）对照品溶液的制备  

取减压干燥至恒重的灵芝酸A、B对照品，加入甲醇制成每1 ml含164 μg灵芝酸A和含52 μg灵芝酸B的混标溶液；

（2）供试品溶液的制备  

取灵芝水提物0.5 g，置25 ml容量瓶中，加甲醇超声处理10 min，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；

（3）高效液相色谱检测  

以辛烷基键合硅胶为填充剂，乙腈为流动相A，0.1 % 醋酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为22 ℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸A计算，应不低于5000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

所述灵芝酸C₂含量的检测方法如下：

（1）对照品溶液的制备  

取减压干燥至恒重的灵芝酸C₂对照品，加甲醇制成每1 ml含33 μg灵芝酸C₂的对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备  

取灵芝水提物0.5 g，置25 ml容量瓶中，加甲醇超声处理10 min，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；

（3）高效液相色谱检测  

以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈为流动相A，0.1 % 醋酸水溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为20℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸C₂计算，应不低于5000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求1所述的灵芝水提物的质量控制方法，其特征在于：所述粗多糖含量的检测方法如下：

（1）标准曲线绘制

    取干燥至恒重的葡聚糖对照品，加水制成每1 ml含葡聚糖1 mg的溶液，分别精密吸取上述标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml至10.0 ml量瓶中，加水稀释至刻度，分别吸取上述溶液2.0 ml至25 ml比色管中，加入50 g/L苯酚溶液1.0 ml，混匀，精密加入浓硫酸10.0 ml，混匀，置水浴中煮沸2 min，混匀，冷却至室温后用分光光度计在485 nm波长处测定吸光度，以相应的试剂为空白，以葡聚糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；

（2）供试品溶液的制备

取灵芝水提物0.4 g，置50 ml锥形瓶中，加水25.0 ml，超声10 min，滤过；吸取滤液5.0 ml至50 ml离心管中，缓慢加入无水乙醇20 ml，边加边摇匀，4 ℃放置12 h，取出， 3000 r/min离心8 min，弃去上清液，沉淀加水溶解并转移至10.0 ml容量瓶中，加水定容，摇匀；吸取上述定容后的溶液2.0 ml，置于15 ml离心管中，加入100 g/L氢氧化钠溶液2.0 ml、铜试剂2.0 ml，置于沸水浴中煮沸3 min，冷却至室温， 3000 r/min离心8 min，弃去上清液；沉淀用10 %硫酸溶液2.0 ml溶解并转移至10.0 ml容量瓶中，加水定容，摇匀，即得；

（3）样品测定 

吸取供试品溶液2.0 ml，根据步骤（1），自“加入50 g/L苯酚溶液1.0 ml”起，依法测定吸光度，利用标准曲线计算得到葡聚糖的含量。

4.根据权利要求1所述的灵芝水提物的质量控制方法，其特征在于：测定的粗多糖含量≥30.7mg/g，以葡聚糖计；灵芝酸A、B、C₂含量之和，以干燥品计，赤芝、松杉灵芝水提物≥13.3mg/g，紫芝水提物≥1.8mg/g。