[发明专利]黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测技术领域，涉及一种黄瓜果实中丙醇二酸的检测方法，具体涉及一种利用高效液相色谱技术(HPLC)对黄瓜果实中丙醇二酸进行定性定量的检测方法。

背景技术

丙醇二酸(Tartronic acid)是一种小分子有机酸。它可抑制碳水化合物在动物体内转化为脂肪。现代药理学研究表明黄瓜果实中含有丙醇二酸，可以阻止人体内脂肪堆积，有减肥和预防冠心病的功效。黄瓜发涩的口感主要来自黄瓜所含的丙醇二酸，这是其它一般蔬菜不含的成分。丙醇二酸和唾液融合会有点儿发涩的口感。据研究，黄瓜中所含丙醇二酸无毒副作用，是良好的天然减肥食品。

丙醇二酸在不同品种的黄瓜果实中含量差异比较大。目前关于黄瓜中含有丙醇二酸的宣传报道有很多，但却没有黄瓜中丙醇二酸的鉴定和含量检测方法，此方面研究国内外尚属空白。

鉴于丙醇二酸的减肥和美容功效以及黄瓜在人们餐桌上的重要性，预计此领域的研究将会倍受青睐。

发明内容

针对目前各种关于黄瓜中含有丙醇二酸的报道，但却没有相应的实验方法对其进行定性定量检测，本发明提供一种黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

(1)黄瓜果实的前处理：将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；

(2)丙醇二酸的提取：将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液；

(3)丙醇二酸的HPLC检测：HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测，所述流动相为硫酸钠溶液；流速为0.8～1.0ml/min；r＝215nm，进样量为10μl；

(4)丙醇二酸定性定量方法的建立：用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。

本发明通过建立黄瓜果实中丙醇二酸的检测方法，对发掘黄瓜中丙醇二酸含量高和低的种质资源，从而为黄瓜种质资源创新、高丙醇二酸专用品种选育及其产品开发奠定基础。此方法前处理简单，成本低，可同时分析多个样品，重复性好，结果精确稳定。

附图说明

图1为5mg/ml丙醇二酸标准品的HPLC图；

图2为丙醇二酸标准曲线。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式按照如下方法检测黄瓜果实中丙醇二酸：

(1)黄瓜果实的前处理：

将黄瓜果实去除两端末梢部分，然后切成段，去除种腔部分(包括种子)，用榨汁机粉碎至糊状，取少量于研钵中研磨。

(2)丙醇二酸的提取：

将研磨好的黄瓜果实样品装入1.5ml离心管中，记录管中样品重量。然后离心，取上清液过0.45μm滤膜，进行HPLC检测。

(3)丙醇二酸的HPLC-DAD检测：

HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择测定波长后检测。

(4)丙醇二酸定性定量方法的建立：

用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，在0.5～10mg/ml浓度范围内，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值(0.5mg/ml：415309.3；1mg/ml：1073755；2mg/ml：2310325；5mg/ml：6693463；10mg/ml：14609955)为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线(见图2)，线性方程为：y＝1498.2x-522765，R²＝0.9988，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。

本实施方式所述步骤(1)中，黄瓜果实为新鲜黄瓜，或是新鲜黄瓜粉碎后装入袋中，置于-20℃下保存。

本实施方式所述步骤(1)中，要将黄瓜研磨至完全没有颗粒的状态，达到细胞破碎的目的。

本实施方式所述步骤(2)中，要做两管样品，每管装混合均匀的黄瓜样品1.40g左右，先称出空管的重量，再称出加样品后的总重量。在10000～12000r/min条件下离心3～6min。