[发明专利]一种红凤菜蛋白提取物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

    本发明具体涉及一种红凤菜蛋白提取物及其制备方法与应用。

背景技术

    红凤菜（Gynura bicolor DC.）为菊科三七草属多年生草本植物，主要分布于我国南方各地。红凤菜别名血皮菜、观音菜、观音苋、紫背天葵 等，可作蔬菜食用，具有一定的降血糖作用，部分地区有少量栽培。目前对于红凤菜降血糖作用的研究还不完善，从红凤菜中分离得到的主要化学成分为黄酮类成分，这些黄酮类成分又以山柰酚、槲皮素、芦丁、异槲皮素及其苷类为主，均为常见的黄酮类化学成分，无特别显著的降血糖效果。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种具有显著抑制α-葡萄糖苷酶活性、从而达到降血糖效果的红凤菜蛋白提取物及其制备方法以及在保健品或药物制备方面的应用。

为了达到上述目的，本发明提供了一种红凤菜蛋白提取物，以红凤菜植物的新鲜叶片为原料，通过蛋白提取方法制备得到。

上述蛋白提取方法为采用Tris-HCl缓冲液提取、硫酸铵盐析法沉淀。Tris-HCl缓冲液浓度为20-100 mmol/L，pH值为7.50-8.80；提取缓冲液中含有苯甲基磺酰氟（PMSF）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na₂）、二硫苏糖醇（DTT）、维生素C（Vc）和氯化钠（NaCl）；PMSF的浓度为0.01-1 mmol/L，PVP的质量百分浓度为0.1-1%，EDTA-Na₂的浓度为0.2-2 mmol/L，DTT的浓度为2-50 mmol/L，Vc的浓度为1-10mmol/L，NaCl的质量百分浓度为0.5-1%；缓冲液的加入量为每克红凤菜新鲜叶片加入5-10毫升缓冲液。硫酸铵盐析法沉淀为依次在硫酸铵的饱和度为20%、50%和80%下进行分级沉淀，分别得到0-20%饱和度的蛋白提取物、20-50%饱和度的蛋白提取物以及50-80%饱和度的蛋白提取物；0-20%饱和度的蛋白提取物或50-80%饱和度的蛋白提取物为得到的红凤菜蛋白提取物。

本发明还提供了该红凤菜蛋白提取物的制备方法，包括以下步骤：

（1）提取：取红凤菜的新鲜叶片，加入预冷的提取缓冲液，匀浆，在4℃提取20min，过滤，取滤液，离心，得到的上清液即为提取液；提取缓冲液是浓度为20-100 mmol/L的Tris-HCl缓冲液，pH值为7.50-8.80；提取缓冲液中含有苯甲基磺酰氟（PMSF）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na₂）、二硫苏糖醇（DTT）、维生素C（Vc）和氯化钠（NaCl）；PMSF的浓度为0.01-1 mmol/L，PVP的质量百分浓度为0.1-1%，EDTA-Na₂的浓度为0.2-2 mmol/L，DTT的浓度为2-50 mmol/L，Vc的浓度为1-10mmol/L，NaCl的质量百分浓度为0.5-1%；缓冲液的加入量为每克红凤菜新鲜叶片加入5-10毫升缓冲液；

（2）盐析法沉淀：将步骤（1）中得到的提取液，加入硫酸铵，使饱和度达20-80%，在4℃沉淀10-30min后，离心；

（3）透析：取步骤（2）中离心得到的沉淀，加入溶解缓冲液（10-50 mmol/L Tris-HCl，pH7.50-8.80，含2-50 mmol/L DTT），使沉淀完全溶解，将溶液装入透析袋中进行透析，得到蛋白质溶液；

（4）冷冻干燥：将步骤（3）制得的蛋白质溶液进行冷冻干燥，所得干燥粉末即为红凤菜蛋白提取物。

步骤（2）中所述的硫酸铵的饱和度为20%，沉淀10min，离心15min，取沉淀，即得0-20%饱和度的蛋白提取物；所述离心的转速为10000rpm，温度为4℃。或该盐析法为分级沉淀法，具体步骤如下：在提取液中加入硫酸铵使饱和度达20%，4℃放置10min后，离心15min；取上清液，加入硫酸铵使饱和度达50%，4℃放置10min后，离心15min；取上清液，继续加入硫酸铵使饱和度达80%，4℃放置10min后，离心15min ，取沉淀，得到50-80%饱和度的蛋白提取物；离心的速度为10,000 rpm，温度为4℃。

本发明还提供了该红凤菜蛋白提取物在制备抑制α-葡萄糖苷酶抑制剂类的保健品或药物上的应用。