[发明专利]一种红凤菜蛋白提取物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种红凤菜蛋白提取物，以红凤菜植物的新鲜叶片为原料，通过蛋白提取方法制备得到。

2.根据权利要求1所述的红凤菜蛋白提取物，其特征在于：所述蛋白提取方法为采用Tris-HCl缓冲液提取、硫酸铵盐析法沉淀。

3.根据权利要求2所述的红凤菜蛋白提取物，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液浓度为20-100 mmol/L，pH 7.50-8.80；所述缓冲液中含有苯甲基磺酰氟、聚乙烯吡咯烷酮、乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、维生素C和氯化钠；所述缓冲液中苯甲基磺酰氟的浓度为0.01-1 mmol/L，聚乙烯吡咯烷酮的质量百分浓度为0.1-1%，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.2-2 mmol/L，二硫苏糖醇的浓度为2-50 mmol/L，维生素C的浓度为1-10 mmol/L，氯化钠的质量百分浓度为0.5-1%；所述缓冲液的加入量为每克红凤菜新鲜叶片加入5-10毫升缓冲液。

4.根据权利要求2所述的红凤菜蛋白提取物，其特征在于：所述硫酸铵盐析法沉淀为依次在硫酸铵的饱和度为20%、50%和80%下进行分级沉淀，分别得到0-20%饱和度的蛋白提取物、20-50%饱和度的蛋白提取物以及50-80%饱和度的蛋白提取物；所述0-20%饱和度的蛋白提取物或50-80%饱和度的蛋白提取物为所述红凤菜蛋白提取物。

5.一种权利要求1所述红凤菜蛋白提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）提取：取红凤菜的新鲜叶片，加入预冷的提取缓冲液，匀浆，在4℃提取20min，用2层纱布过滤，取滤液，离心，所得上清液即为提取液；所述提取缓冲液是浓度为20-100 mmol/L的Tris-HCl缓冲液，pH 7.50-8.80；所述提取缓冲液中含有苯甲基磺酰氟、聚乙烯吡咯烷酮、乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、维生素C和氯化钠；所述缓冲液中苯甲基磺酰氟的浓度为0.01-1 mmol/L，聚乙烯吡咯烷酮的质量百分浓度为0.1-1%，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.2-2 mmol/L，二硫苏糖醇的浓度为2-50 mmol/L，维生素C的浓度为1-10 mmol/L，氯化钠的质量百分浓度为0.5-1%；所述缓冲液的加入量为每克红凤菜新鲜叶片加入5-10毫升缓冲液；

（2）盐析法沉淀：将步骤（1）中得到的提取液，加入硫酸铵，使饱和度达到20-80%，在4℃沉淀10-30min后，离心；

（3）透析：取步骤（2）中离心得到的沉淀，加入溶解缓冲液，使沉淀完全溶解，将溶液装入透析袋中进行透析，得到蛋白质溶液；所述溶解缓冲液是浓度为10-50 mmol/L的Tris-HCl缓冲液，pH 7.50-8.80；所述溶解缓冲液含有2-50 mmol/L的DTT；

（4）冷冻干燥：将步骤（3）制得的蛋白质溶液进行冷冻干燥，所得干燥粉末即为红凤菜蛋白提取物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中硫酸铵的饱和度为20%，沉淀10min，离心15min，取沉淀，即得0-20%饱和度的蛋白提取物；所述离心的转速为10000rpm，温度为4℃。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的盐析法沉淀采用分级盐析，具体步骤如下：在提取液中加入硫酸铵使饱和度达20%，4℃放置10min后，离心15min；取上清液，加入硫酸铵使饱和度达50%，4℃放置10min后，离心15min；取上清液，继续加入硫酸铵使饱和度达80%，4℃放置10min后，离心15min ，取沉淀，得到50-80%饱和度的蛋白提取物；所述离心的速度为10000 rpm，温度为4℃。

8.权利要求1所述红凤菜蛋白提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类保健品或药物上的应用。