[发明专利]豌豆孢囊线虫特异性RAPD标记和SCAR标记快速分子检测方法有效
| 申请号： | 201210200468.6 | 申请日： | 2012-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN102690825A | 公开（公告）日： | 2012-09-26 |
| 发明（设计）人： | 彭德良;亓晓莉;彭焕;黄文坤;丁中;贺文婷 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬红 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 豌豆 孢囊 线虫 特异性 rapd 标记 scar 快速 分子 检测 方法 | ||
1.豌豆孢囊线虫特异性RAPD标记的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。
2.根据权利要求1所述的豌豆孢囊线虫特异性RAPD标记的DNA片段的保守序列设计的特异性引物。
3.根据权利要求2所述的特异性引物为HgoF1和HgoR1，其序列为：
HgoF1：5’-GATGTTGTGCTTTCACAGGTTTG-3’，
HgoR1：5’-TGTTTGTACTCACTCCTTCGCTC-3’。
4.豌豆孢囊线虫SCAR标记快速分子检测方法，其特征在于PCR反应体系中含有权利要求2或3所述的特异性引物。
5.根据权利要求4所述的检测方法，所述的特异性引物为HgoF1和HgoR1，其序列为：
HgoF1：5’-GATGTTGTGCTTTCACAGGTTTG-3’，
HgoR1：5’-TGTTTGTACTCACTCCTTCGCTC-3’。
6.根据权利要求5所述的检测方法，所述反应体系总体积为25μl，其中2.5μl 10×PCR含Mg2+的Buffer；2.0μl dNTP；1.0μl浓度为0.1μg/μl的引物HgoF1；1.0μl浓度为0.1μg/μl的引物HgoR1；0.25μl浓度为5U/μl的Taq DNA聚合酶；1.0μl模板DNA；ddH2O补足25μl。
7.根据权利要求6所述的检测方法，所述PCR的扩增程序为：94℃预变性5min，然后94℃30S，56℃30S，72℃1min循环35次，72℃延伸10min，保存在4℃条件下。
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