[发明专利]表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒

说明书

本案是申请日为2003年5月14日、中国申请号03811106.3、发明名称为“表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒”的发明申请的分案申请。

本发明涉及能够表达两个或多个同源外源基因的重组痘病毒，其中所述基因与病毒基因组异源，但相互之间具有同源性。所述基因尤其来源于微生物非常相关的变种或亚型。本发明进一步涉及制备这种重组痘病毒的方法以及这种重组痘病毒作为药物或疫苗的应用。此外，本发明还提供一种对活体动物包括人的免疫反应进行影响优选为诱导的方法。

发明背景

每一个活生物体经常受感染性或致病因子如细菌、病毒、真菌或寄生虫的挑战。生物体的所谓免疫系统能够阻止它们免受这些致病因子引起的持久感染、疾病或中毒。

哺乳动物的免疫系统可分成特异性和非特异性部分，虽然这两部分紧密交联。非特异性免疫反应能够介导对广泛不同的病原体或感染因子(agent)的即时防御。特异性免疫反应在当生物体第一次受到物质的挑战后，于迟滞期后形成。特异性免疫反应主要是因为产生了抗原特异性抗体，并形成巨噬细胞和淋巴细胞，如细胞毒素T-细胞(CTL)。之所以称为特异性免疫反应，是基于下述事实，生物体个体受到特异性感染后能够痊愈，但对其它感染病仍然易感。通常，同样的或非常类似的感染因子的第二次感染引起非常温和的症状或根本没有发病的症状。这种所谓的免疫持续非常长的时间，有的甚至持续终生。这种潜在效果通常称为免疫记忆，对此可以用于接种疫苗。

术语接种疫苗描述一种方法，其中用无毒、部分或失活形式的感染因子攻击个体，影响优选诱导所述个体的免疫反应，导致即使不是终生但长时间持续的对特异感染因子的免疫抵抗。

人所患的天花疾病是由于天花(Variola)病毒引起的。天花病毒属于痘病毒科(Poxviridae)，这是具有复杂DNA大的病毒科，可在脊椎动物和无脊椎动物细胞的细胞质中复制。

根据寄生在脊椎动物和昆虫的不同宿主范围，可将痘病毒科分成两个亚科即脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirinae)和昆虫痘病毒亚科(Entomopoxvirinae)。脊椎动物痘病毒亚科包括正痘病毒属(Orthopoxviruese)和禽痘病毒属(Avipoxviruse)以及其它一些属的病毒(Fields Virology,ed.by Fields B.N.,Lippincott-Raven Publishers,3rd edition 1996,ISBN:0-7817-0253-4,Chapter 83)。

正痘病毒属包括引起人患天花的病原即天花病毒，和其它非常重要的病毒，如骆驼痘病毒、牛痘病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒、猴痘病毒和痘苗病毒。该属中的所有成员具有遗传相关性，相似的形态和宿主范围。限制性内切酶图谱甚至表明正痘病毒属的不同成员之间具有高至90%的序列同一性(Mackett & Archard,[1979],J Gen Virol,45:683-701)。

使用了至少100年的针对天花的疫苗接种的疫苗称为痘苗病毒(VV)。不清楚的是，VV是否是来源于通过延长的连续传代的痘苗病毒或牛痘病毒－目前已根除的活的代表物或者是遗传重组的产物。此外，在VV的历史过程中，形成了许多痘苗株系。不同株系表现出不同的免疫原性，并涉及不同程度的潜在的并发症，最严重的可引起接种后脑炎。然而，许多这些株系用于针对天花的接种。例如NYCBOH、Western Reserve或Wyeth株系主要在美国使用，而Ankara、Bern、Copenhagen、Lister和MVA菌株在欧洲使用。WHO在1980年实施的VV不同株系的全球接种计划而最终宣告天花病毒被成功根除。