[发明专利]表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒

权利要求书

1.一种重组痘病毒，至少包含两个具有至少50％同源性的同源外源基因，其中每一个所述基因插入到所述病毒基因组的不同插入位点。

2.重组痘病毒，至少包含两个具有至少60％同源性的同源外源基因。

3.根据权利要求1或2的重组痘病毒，其中所述基因具有65-75％的同源性。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组痘病毒，其中所述基因来源于黄病毒。

5.根据权利要求4的重组痘病毒，其中所述黄病毒是登革病毒。

6.根据权利要求4或5的重组痘病毒，其中所述基因是至少两个来源于至少两个不同血清型病毒的同源基因。

7.根据权利要求4-6中任一项的重组痘病毒，其中所述基因是至少两个PrM基因。

8.根据权利要求4-7中任一项的重组痘病毒，其中所述基因是4个PrM基因。

9.根据权利要求1-8中任一项的重组痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒。

10.根据权利要求9的重组痘病毒，其中所述痘苗病毒是修饰痘苗Ankara病毒（MVA）。

11.根据权利要求10的重组痘病毒，其中用于产生所述重组病毒的MVA是保藏于欧洲动物细胞保藏中心（ECACC）、保藏号为V00083008的MVA-BN。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的重组痘病毒，其中所述痘病毒在哺乳动物细胞中属于复制缺陷型或不能复制。

13.根据权利要求12所述的重组痘病毒，其中所述哺乳动物细胞为人细胞。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的重组痘病毒，其中所述基因插入在所述痘病毒基因组中的天然发生的缺失位点和/或间隔区。

15.一种疫苗，包含根据权利要求1-14中任一项的重组痘病毒。

16.一种药物组合物，包含根据权利要求1-14中任一项的重组痘病毒和药物学可接受载体、稀释剂、佐剂和/或添加剂。

17.根据权利要求1-14中任一项的重组痘病毒在制备药物或疫苗中的用途。

18.根据权利要求1-14中任一项的重组痘病毒、根据权利要求15的疫苗或权利要求16的组合物在制备影响活体动物的免疫反应的药物或疫苗中的用途。

19.根据权利要求18的用途，其中所述活体动物为人。

20.包含有根据权利要求1-14中任一项所述的重组痘病毒的细胞。

21.一种产生权利要求1-14中任一项所述的重组痘病毒的方法，包括如下步骤：

－用痘病毒感染细胞；

－用第一载体构建体转染被感染细胞，其中第一载体构建体包含与所述痘病毒基因组异源的基因和能够指导异源基因整合到所述痘病毒基因组中的插入位点的痘病毒基因组序列;

－鉴定和分离所产生的重组痘病毒；

－用上述感染所述细胞的步骤所获得的重组痘病毒和另一载体构建体重复上述步骤，所述另一载体构建体包含有另外的与所述痘病毒基因组异源且与第一载体构建体中的基因同源的基因。

22.根据权利要求21的方法，在鉴定和分离所产生的重组痘病毒步骤中，还包括对其进行纯化。

23.一种试剂盒，包括：

－两个或更多个载体构建体，每一个构建体均包含受痘病毒表达调控元件转录调控的基因，其中包含在不同载体中的基因是具有至少50%同源性的同源基因，并且其中所述每一个基因均侧接有能够指导将所述基因整合到痘病毒基因组中的痘病毒DNA序列；和

－鉴定和/或选择所述同源基因已整合到其基因组中的重组痘病毒的试剂。

24.根据权利要求23的试剂盒，其中每一个同源基因均侧接有能够指导将每一个载体构建体中的所述同源基因均整合到所述痘病毒基因组中不同插入位点的痘病毒DNA序列。

25.来源于权利要求1-14中任一项所述的重组痘病毒的基因组的DNA序列，其中所述DNA序列包括至少两个同源基因和至少部分所述痘病毒基因组的序列。