[发明专利]动脉粥样硬化易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本专利属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种动脉粥样硬化易感基因无创检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估动脉粥样硬化遗传易感性的风险级别，并作为预防动脉粥样硬化的建议指导。 

背景技术

动脉硬化是以动脉壁增厚、变硬和弹性减退为特征的一类血管病。动脉粥样硬化属于其中最为常见且危害性最大的一类。其主要特征为受累动脉内膜出现脂类和复合糖类的沉着和积聚，并出现纤维组织增生和钙质沉着。由于动脉内积聚的脂类物质成黄色小米粥样，故而被称为动脉粥样硬化。常常会导致血栓形成和供血障碍等，严重时可导致由受累动脉负责供血的组织或器官缺血甚至坏死，是目前老年人病死的主要原因之一。

动脉粥样硬化通常是由于脂肪代谢紊乱以及神经血管功能失调所引起的。其发生除了肥胖、吸烟、缺乏运动以及患有高血压、高血脂等原因外，遗传因素也是不容忽视的重要因素。有统计结果表明，许多动脉粥样硬化的患者都有动脉粥样硬化、糖尿病以及肿瘤病和精神分裂症等家族病史。有研究结果也显示血管紧张素转化酶( ACE )、脂蛋白脂酶（LPL）、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) 等基因的多态性均与动脉粥样硬化的发生、发展有直接关联。

肾素-血管紧张素系统在动脉粥样硬化的发生与发展中扮演着重要的角色。其中的血管紧张素转化酶( ACE )负责将血管紧张素I转化为有生物活性的血管紧张素II。ACE第16内含子中由287个碱基对组成的Alu重复序列的存在（I）或缺失（D）被称为插入/缺失（I/D）多态性。该多态性是决定循环ACE活性的主要因素。ACE的DD基因型可导致较高水平的血管紧张素II，从而导致纤溶酶原激活物抑制物1的水平增高，继而促使血栓形成，被视为动脉早期粥样硬化的一种潜在危险因素。

脂蛋白脂酶（LPL）是脂类代谢的关键酶，主要负责水解极低密度脂蛋白和乳糜微粒中的甘油三酯。转化产生的小分子脂肪酸可供各组织贮存、利用。在动脉粥样硬化过程中，LPL发挥着双重的作用。一方面，LPL可以降低血浆中的甘油三酯并增加高密度脂蛋白水平，从而可以抑制动脉粥样硬化。但同时，血管壁上的LPL所产生的富含胆固醇的裂解产物及脂肪酸被巨噬细胞摄取后可转变为泡沫细胞，且还会刺激血管壁平滑肌细胞增生使动脉壁变厚，加速动脉粥样硬化的形成。位于LPL内含子8区的Hind III酶切位点多态性已发现与动脉粥样硬化有密切关联。Hind III（+/+）的基因型频率在患者中要显著高于对照组。但其对动脉粥样硬化的具体影响机制目前仍存在争议。多数研究认为Hind III（+/+）基因型会导致血浆中甘油三酯水平上升，使动脉壁增厚。

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是同型半胱氨酸（Hcy）代谢途径中的关键酶。MTHFR基因的第677位C→T突变（C677T）会使编码的氨基酸从缬氨酸变为丙氨酸，从而影响酶的活性及热稳定性并使血浆中同型半胱氨酸浓度升高。而高Hcy血症是动脉粥样硬化的一个独立危险因素。因此MTHFR也属于动脉粥样硬化的易感基因之一。

建立简单、快速的动脉粥样硬化易感基因无创检测方法，能够用于检测与动脉粥样硬化发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患动脉粥样硬化的高危人群，从而根据检测结果尽早采取预防措施，这对于降低动脉粥样硬化发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于ACE基因上I/D (rs4646994)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII (rs320)的3个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估动脉粥样硬化发病风险级别，本发明提供一种动脉粥样硬化基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测ACE基因上I/D (rs4646994)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、LPL基因上HindIII (rs320)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：