[发明专利]一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法。

背景技术

流感是一种常见多发的急性病毒性呼吸道传染病，它严重地危害着人类健康，流行于全世界，其波及范围之广，造成经济损失之大位于传染性疾病之首。神经氨酸酶(NA)是作为流感病毒表面的一种重要抗原，在病毒感染宿主细胞时，主要起着识别细胞表面的流感病毒受体，促进病毒进入靶细胞内的作用。

由于所有A型和B型流感病毒神经氨酸酶活性中心的氨基酸序列均高度保守，所以筛选神经氨酸酶抑制剂是抗流感病毒的有效方法。目前，一些人工合成的神经氨酸酶抑制剂用于流感的治疗，但其价格昂贵，并会对神经系统产生不良反应等副作用。因此，越来越多的研究致力于探寻出具有神经氨酸酶抑制活性的天然产物。Jones J C等发现，来源于纤维原细胞生长因子的一段20个氨基酸的多肽(EB)具有针对流感病毒各亚型的广谱抗病毒活性，也有研究表示从茶叶中提取的多酚类物质有抗流感的功效。

目前，尚未见到从鳕鱼皮中提取能抑制神经氨酸酶活性肽的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案：

将鳕鱼皮去鳞去肉洗净，用HCl浸泡20-30min，将浸泡后的鳕鱼皮和蒸馏水按1∶5-7g/ml的比例匀浆，用NaOH将浆液的pH值调为2.0-2.5后加入胃蛋白酶，加入量为鳕鱼皮质量的1％，在37℃的温度下酶解6-8小时制得一种能抑制神经氨酸酶的活性肽。

本发明以低值鳕鱼皮为原料，利用胃蛋白酶定向水解制备一种能抑制神经氨酸酶的活性肽，所得活性肽具有很强的抗H1N1流感病毒活性，并且安全、无毒，在食品和药品领域具有广阔的应用前景。

具体实施方式

将鳕鱼皮去鳞去肉洗净，用质量浓度0.3％的HCl浸泡20-30min(最好是25min)，将鳕鱼皮和蒸馏水按1∶5-7g/ml(最好是1∶6g/ml)的比例匀浆，用6mol/L的NaOH将浆液的pH值调为2.0-2.5(最好是2.0)后加入胃蛋白酶，加入量为鳕鱼皮质量的1％，在37℃的温度下酶解6-8小时(最好是7小时)制得一种能抑制神经氨酸酶的活性肽。

体外神经氨酸酶抑制实验结果显示，10mg/ml的活性肽抑制率可达65.1％；细胞实验证明，本发明所制得的活性肽具有显著的抗H1N1流感病毒的活性。