[发明专利]乙型肝炎病毒表面L蛋白相关肽

说明书

本发明专利申请是申请人于2005年8月12日提交的、申请号为200510028721.4、发明名称为“乙型肝炎病毒表面L蛋白相关肽”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于预防、治疗乙型肝炎病毒（human hepatitis B virus,HBV）感染的HBV表面L蛋白衍生肽、去除这些多肽抗原性的筛选方法以及通过该方法筛选得到的去抗原性衍生肽。特别是本发明涉及来源于B基因型adw血清型、C基因型adr血清型以及D基因型ayw血清型HBV的L蛋白pre-S1区多肽。同样特别地，本发明涉及去除HBV表面L蛋白衍生肽抗原性的筛选方法以及通过该方法获得的可阻断HBV感染却不与抗体结合的HBV表面L蛋白去抗原性衍生肽。该去抗原性衍生肽可与抗HBV表面L蛋白抗体协同抑制HBV感染。

背景技术

1．HBV的流行病学

HBV感染是全球最为严重的公共卫生问题之一，是仅次于性病和水痘的第三常见疾病。全球约有20亿人感染过HBV，75％的世界人口生活在乙型肝炎高发区，慢性HBV感染者超过3.5亿。每年与HBV感染相关的死亡人数高达100万(1)，每年新增感染估计是HIV新增感染的2.5～4倍。世界上75％的HBV慢性感染者集中在亚洲（约为2.87亿），中国是乙型肝炎的高流行区，70年代末和90年代初两次全国肝炎流行病学调查的数据显示，我国感染过HBV者6.9亿，感染率为57.6％，全国长期携带HBV者1.2亿，HBV表面抗原携带率9.75％，现有的慢性乙型肝炎患者2000余万，且自1995年开始，中国人群乙型肝炎发病比例呈逐年升高趋势，因此在卫生部《2005年卫生工作要点》中已将乙型肝炎列入我国需要重点控制的四大疾病之一。

2．HBV感染的预防与治疗现状

HBV的重要性早已在世界范围内得到广泛公认，其预防和治疗也被置于优先地位。但迄今尚缺乏可清除体内HBV的药物，疗效相对确切的抗病毒药物主要是α干扰素和核苷类似物（拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和特必夫定等）。α干扰素主要通过免疫调节和诱生靶细胞内抗病毒蛋白而发挥抗病毒作用；核苷类似物则作用于HBV逆转录酶，抑制病毒DNA链的合成，从而抑制HBV DNA的复制。经过1年的标准疗程治疗，约33%的α干扰素治疗患者和约16%的拉米夫定治疗患者可获得彻底或部分血清学应答（HBsAg转阴、HBeAg均转阴、出现或不出现抗-HBe抗体）、完全的病毒学应答（HBV DNA转阴）和生化应答（丙氨酸氨基转移酶间隔1个月连续2次检测均正常，肝功能复常）。

自从1970年Krugman获得最早的乙型肝炎疫苗后，各国相继利用无症状HBsAg携带者的血浆提取血源性HBsAg制备HBV疫苗。血源性HBV疫苗经过长期使用被证明安全有效，但由于其来源有限，制备成本高昂，已被基因重组HBV疫苗取代。目前主要的重组疫苗包括酵母和中国仓鼠卵巢细胞表达的重组乙肝疫苗。这些疫苗免疫原性强，3针全程免疫后抗HBsAg抗体阳转率不低于85%。但其主要缺点是抗体应答较迟，HBV感染产妇的新生儿初次免疫若超过7天以上，则失去HBV疫苗对新生儿阻断垂直传播的作用。而且10%～15%接种者不产生应答或低应答，该人群仍可被HBV感染。

乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)系用经乙型肝炎疫苗免疫健康人后，采集的高效价血浆或血清分离提取制备的免疫球蛋白制剂，其抗体效价在100IU/ml以上。适用于突发意外感染人群、免疫功能低下者以及HBV感染产妇新生儿的被动免疫预防。我国的慢性HBV感染者约有30%-50%通过母婴传播，为阻断HBV母婴围产期传播，普遍将HBIG与乙肝疫苗联合应用，虽然保护率可达80%以上，但HBIG提供的阻断贡献并不明显，联合应用仅较乙肝疫苗单用提高5%～10%的阻断率，而且联合应用后HBV感染产妇新生儿HBV感染率仍较健康产妇新生儿高4倍。近年发现，宫内感染可能是母婴传播的重要途径，HBV感染孕妇引产胎儿肝脏或血液的HBV感染标志检出率可达40%，HBsAg阳性母亲的婴儿的宫内感染率约16%。因此国内有些医院在妊娠的最后3～4个月中对HBV感染孕妇每月一次注射大于200IU的HBIG，以期预防胎儿HBV宫内感染。但该方法宫内传播阻断效果并不理想，且可能导致HBV S区变异株的出现和免疫复合物病理免疫反应的发生。