[发明专利]一种用于改良感病水稻品种黑条矮缩病抗性的引物和方法

说明书

技术领域

    本发明针对水稻黑条矮缩病主效抗性QTL——qRBSDV-6，提供了一种利用其紧密连锁分子标记进行辅助选择而改良水稻品种黑条矮缩病抗性的方法，属于分子遗传学领域。

背景技术

水稻黑条矮缩病是一种主要由灰飞虱（Laodelphax striatellus Fallèn）充当媒介而传播的病毒病，感病植株一般表现严重矮缩、叶色浓绿、叶片背部叶脉出现短线白色条纹、不能抽穗或包颈穗、穗粒形变小甚至畸形而显著影响经济产量等症状。由于水稻一旦感染该病毒便无法防治，因而被喻之为水稻“癌症”。该病害上世纪60年代在中国首次发生，近年来，随着耕作制度的变化及暖冬年份的持续出现，黑条矮缩病在浙江、江苏、上海等地重新猖獗流行，局部地区严重发生，而生产上应用的绝大多数品种对该病害均表现感病，给水稻生产造成巨大危害。

目前，虽然没有发现对黑条矮缩病表现免疫的水稻种质，有关其抗性遗传、育种研究的报道也较少，但已有报道表明不同类型水稻品种对黑条矮缩病的抗性有明显差异。本研究小组利用“珍汕97/明恢63”的重组自交系群体，通过2个发病区的自然接种鉴定，分别在第6、7、9和11染色体上检测到6个水稻黑条矮缩病的抗性QTL，均来自于亲本明恢63，尤其是第6染色体上R2869-Waxy区间定位的2个紧密连锁的QTL（因为是初步定位，究竟是一个效应较大的QTL，还是两个紧密连锁的QTL还不能确定，将其初步命名为qRBSDV-6），具有LOD值大、效应显著等特点，具有重要育种价值（潘存红、李爱宏等，水稻黑条矮缩病抗性QTL分析，作物学报，2009，35（12）：1-5）。

生产上目前对水稻黑条矮缩病的防治主要结合耕作制度调整、栽培技术改进以及适期防治病虫害等，但往往难以达到预期效果，且对环境造成较大污染。培育抗病品种是防治各类病害最经济、有效的手段，具有重要理论和实践意义。针对定位的主效抗性QTL，通过分子标记辅助选择的方法，将其导入感病品种的遗传背景中，可有效改良其抗性。

发明内容

本发明的目的是针对第6染色体短臂上的黑条矮缩病主效抗性QTL——qRBSDV-6，提供了其基于PCR技术基础上的双侧紧密连锁分子标记，通过分子标记辅助选择，将其导入感病品种的遗传背景中而改良其黑条矮缩病抗性的方法。

qRBSDV-6初步定位在标记R2869与Waxy之间，由于R2869和Waxy都是RFLP标记，若直接应用于标记辅助选择，存在工作量大、操作烦琐等缺点，因而我们根据上述标记在水稻日本晴基因组序列中的物理位置（RGP网站，http：//rgp.dna.afrc.go.jp/)），结合Gramene网站（http://www.gramene.org）上公布的水稻SSR标记，在标记R2869与Waxy的外侧筛选了2个在抗性QTL供体亲本明恢63与部分感病亲本（如淮稻5号、武陵粳1号、扬粳9538等）间具有良好多态性的SSR标记RM7158和RM587，用于目标抗性QTL（qRBSDV-6）的分子标记辅助选择。

本发明公开了水稻SSR标记RM7158和RM587在水稻品种黑条矮缩病抗性分子标记辅助选择中的应用。

本发明提供的分子标记RM7158和RM587，分别由下列引物对经PCR扩增获得： 

1）标记引物RM7158，

正向引物序列，5’-CGTCCATGGACTTGTTAGC-3’（SEQ ID NO.1）

反向引物序列，5’-ACGGATACGCCATCCACAT-3’ （SEQ ID NO.2）；

2）标记引物RM587，

正向引物序列，5’-ACGCGAACAAATTAACAGCC-3’ （SEQ ID NO.3）

反向引物序列，5’-CTTTGCTACCAGTAGATCCAGC-3’ （SEQ ID NO.4）。

上述标记中，RM7158在抗性QTL供体亲本明恢63中的扩增产物是128 bp，而在感病亲本中的扩增产物是144 bp；RM587在抗性QTL供体亲本明恢63中的扩增产物是222 bp，而在感病亲本中的扩增产物是210bp。