[发明专利]一种针对疾病个体化用药的基因分型快速试纸条检测方法

权利要求书

1.一种针对疾病个体化用药的基因分型快速试纸条检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)针对待检测样本基因组DNA的CYP2C19*2（681G>A）、CYP2C19*3（636G>A）、CYP2C19*17（-806C>T）这三个SNP位点，对每一个SNP位点均设计一条野生型特异性引物、一条突变型特异性引物和一条共用引物进行识别与扩增；在野生型特异性引物和突变型特异性引物的5′端均标记地高辛，共用引物的5′端标记生物素；

(2)针对一个SNP位点，平行做两管PCR反应，其中一管加入共用引物与等量的突变型特异性引物，另一管中加入共用引物与等量的野生型特异性引物，两管的PCR反应条件相同并同时置于PCR仪中反应；这样，对于（1）步骤中所述的三个SNP位点，共做六管PCR反应；Taq聚合酶的特异性决定了PCR反应能否顺利进行；

(3)利用链亲和素金磁微粒特有的可目视化特性，采用层析技术并以生物素和链亲和素作用，对步骤(2)得到的扩增产物中SNP基因型完成分型检测；

其中，层析技术采用的试纸条满足：

a、试剂条的免疫层析膜上的质控线处包被有质控用生物素；

b、检测线处包被有捕获用抗地高辛抗体；

c、结合垫上喷涂有链亲和素金磁微粒；

经步骤(2)取出的两管PCR产物分别滴至两支试纸条的样品垫上进行检测，质控线显色表明此次实验有效，即步骤(2)的该管PCR反应顺利，即得到的产物一端标记有生物素，另一端标记有地高辛，滴加至上样垫，一端的生物素与链亲和素磁粒特异性结合之后，通过层析作用上移至检测线处，另一端上的地高辛与检测线上的抗地高辛抗体特异性结合显色，由此判断出其基因型：

滴加含有野生型特异性引物的PCR产物在试纸条的检测线上显色，而含有突变型特异性引物的PCR产物在试纸条的检测线上不显色，则表明基因型为野生型；反之基因型为突变型；若两支试纸条的检测线均显色，则表明基因型为杂合型。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中设计的引物序列如下：

CYP2C19*2（681G>A）引物序列：

  引物名称  序列  CYP2C19*2F：  5′Biotin-ACAACCAGAGCTTGGCATATTGT-3′  CYP2C19*2R(M)：  5′Dig-GGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGTTGCT-3′  CYP2C19*2R(Wt)：  5′Dig-TTTTTAAGTAATTTGTTATGGGTTGCC-3′

CYP2C19*3（636G>A）引物序列：

  引物名称  序列  CYP2C19*3F：  5′Biotin-TGTGCTCCCTGCAATGTGAT-3′  CYP2C19*3R(M)：  5′Dig-AAAAAACTTGGCCTTACCTGGAAT-3′  CYP2C19*3R(Wt)：  5′Dig-AAAAACTTGGCCTTACCTGGAAC-3′

CYP2C19*17（-806C>T）引物序列：

  引物名称  序列  CYP2C19*17F(M)：  5’Dig-ATTTGTGTCTTCTGTTCTCAAATT-3’  CYP2C19*17F(Wt)：  5’Dig-ATTTGTGTCTTCTGTTCTCAAACC-3’  CYP2C19*17R：  5’Biotin-CTGGGATTTGAGCTGAGGTCTT-3’