[发明专利]一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光免疫学检测小分子物质的方法。

背景技术

目前市场上对小分子物质如某些激素、毒品、药物等检测通用的免疫学检测方法主要包括胶体金免疫层析试纸条检测法(Immunochromatographic Assay)、酶联免疫分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)、放射免疫分析法(Radioimmunoass ay，RIA)等。放射免疫分析法是最早建立的经典的免疫分析方法，检测的准确度较高，最低检测限可达10^-3～10^-6ug/ml，样品用量少，且不需要作预处理。但由于放射免疫分析法投资成本较高，耗材成本低，操作较为简单，但对操作人员有较大危害，对环境有污染，因此难以推广应用。胶体金法是临床检测产品的主要检测方法，可以实现床边快速检测，方法操作简便，不需要专业人员即可完成。但由于该法只能定性或半定量，不能全定量检测，所以只能用于急诊检测和初步筛查。酶联免疫法可用于定量检测，但是灵敏度较低，而且受人为因素影响大，操作复杂，需要专业人员并配合仪器操作。

磁性复合微粒，又称磁性微球或磁珠，是20世纪70年代末发展起来并被广泛用于生物医学领域的超顺磁性纳微米复合粒子，是由高分子或无机材料与磁性超细粉末(包括磁性金属如Fe，Co，Ni或其金属氧化物等)构成的胶态复合物。在外加磁场作用下，磁性粒子的超顺磁性可保证既能被快速分离，本身又不会被永久磁化。纳微米级磁性复合微粒具有较高的比表面积，表现出较强的吸附能力。通过物理吸附，或利用修饰在磁性复合微粒表面的活性基团可将酶、抗体、寡核昔酸及核酸等生物活性物质偶联在其表面。

金磁微粒是一种新型磁性无机物复合微粒，由胶体金颗粒与磁性粒子复合形成的，这种材料兼有磁性粒子在外磁场中的可分离性以及胶体金对生物分子的快速固定化等特点，在生物与医学领域具有重要的应用前景。结合磁性纳米粒子的超顺磁性和金表面生物分子可修饰性的双重特质，发明人研制了Fe304/Au磁性复合微粒，并将其实现了商业化。

化学发光免疫分析技术诞生于1977年。Halmann等根据放射免疫分析的基本原理，将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来，建立了化学发光免疫分析法。该技术包含两个系统，即免疫分析系统和化学发光分析系统。因此，它兼具免疫分析高特异性及化学发光高灵敏度于一体的特点。免疫分析系统是应用抗原、抗体间反应的原理，通过将化学发光物或酶标记于抗原或抗体上，经过免疫反应，形成抗原-抗体复合物。化学发光分析系统则是在免疫反应结束后，加入酶的化学发光底物，化学发光物质在氧化剂作用下形成激发态的中间体，不稳定的中间体在回到稳定的基态时，将发射出光子，此时可通过化学发光检测器对化学发光强度进行检测。该方法能够进行定性分析和定量分析，是一种综合性技术。

基于磁性微粒的化学发光免疫分析法是将磁分离技术、免疫分析技术及化学发光检测技术三者有效结合在一起的新型的分析检测技术，因而具有化学发光的高灵敏度、免疫分析的强特异性、磁分离系统的快速分离，此外，还具有检测时间短、线性范围宽、以及易实现自动化等优点，因此，近年来被广泛应用于临床诊断、生物医学、食品安全及毒品检测等众多方面。然而，传统的磁性微粒大多是通过表面功能化修饰后带有的的羧基(-COOH)、羟基(-OH)、氨基(-NH2)、醛基(-CHO)等活性基团与抗原或抗体的共价作用将这些抗原抗体偶联在磁珠表面的，偶联过程复杂，而且在偶联时容易导致抗原或抗体失活，不仅偶联效率低，而且浪费成本，由于这些原因，使得基于磁性微粒的化学发光的普及应用受到一定的限制。

发明内容

本发明提供了一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法，以解决背景技术检测小分子物质存在的局限性、特异性、灵敏性、危险性等问题。

为实现上述发明目的，本发明给出以下基本解决方案：

一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法，包括以下步骤：

(1)包被

以金磁微粒作为免疫反应和固相分离的载体，取与待检小分子物质相应的小分子物质合成抗原，将其偶联在金磁微粒的表面；

(2)封闭

用封闭液封闭金磁微粒表面未与抗原结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用；

(3)与待测物反应