[发明专利]一种促红细胞生成素模拟肽、其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种促红细胞生成素模拟肽、其制备方法，以及含它们的药物组合物及其在治疗以缺乏红细胞生成素或红细胞缺少或缺陷为特征的疾病中的用途。

背景技术

促红细胞生成素（EPO）是一种造血生长因子（Hematopoietic growth factor，HGF），是红细胞生成过程所必须的一种糖蛋白。含有165个氨基酸，分子量约为30.4kD，40%的分子量为糖基化修饰结果，糖基化位点分别是24,38,83位的天冬酰胺侧链氨基N-糖基化及126位丝氨酸侧链羟基O-糖基化。在人体中，EPO主要是在肾脏和胎儿的肝中产生的，由肾小管的管周毛细血管内皮细胞合成并释放。EPO作为一种细胞因子在骨髓造血组织中发挥促进红细胞生成的作用，从而提高血红蛋白的浓度，以保证足够的氧气从肺运输到需氧组织。正常情况下，EPO的生成与组织中氧气浓度成反比关系，组织缺氧时，EPO生成增多，以保证各组织器官得到足够的氧气供给。当血浆EPO浓度在10-25mU/mL范围内，即可维持血红蛋白的正常水平（12-17g/dL），半衰期约为5h。EPO除了能够在造血组织促进红细胞的生成，在非造血组织器官中也发挥着重要作用，如促进一些组织器官的生长发育，参与心血管形成、修复及心肌膜损伤修复过程，EPO还参与大脑对神经元损伤的应答过程及伤口愈合过程。

在红细胞生成过程中，首先由骨髓产生造血祖细胞，在多种细胞因子的作用下形成粒细胞（Granulocyte，G）-幼红细胞（Erythroid，E）-单核细胞（Monocyte，M）-巨核细胞（Megakaryocytic，M）的集落形成单位，再经过爆式红系集落形成单位（Erythroid burst-forming units，BFUe），进一步分化为红细胞系集落形成单位（CFUe）。EPO结合到CFUe表面的EPOR，形成幼红细胞，幼红细胞进一步分化为网状细胞，最后形成红细胞。这个过程不仅需要铁、叶酸、维生素B12等营养物质，还需要许多细胞因子的参与，而EPO是红细胞生成过程中最主要的调控因子。因此，缺乏EPO，就容易引发贫血症。多种继发性贫血症都是由于细胞因子EPO生成不足而引起的。

20世纪80年代，对继发性贫血治疗方法的研究才逐渐引起重视，通过对其病理生理学的研究，研制了一些红细胞生成刺激因子（Erythropoietic-stimulating Agents，ESAs）类药物，主要是EPO受体激动剂。自此，EPO药物一直是药物研究的一个热点，EPO产品的销量持续处于销售量最好药物的第四位，并且EPO市场仍在持续增长。ESAs类药物在继发性贫血的治疗市场上已经占有了主导地位。

1996年，采用噬菌体展示技术用一些由随机肽序列组成的组合库对EPO受体进行扫描，得到了许多与内源性EPO没有序列相关性的短肽，这些短肽能结合EPO受体，引发一系列信号转导，促进相应细胞系的增殖，并且作用机制与EPO相同。但是这些短肽中半数有效浓度（EC₅₀）最小的为200nM，远高于同时测得的EPO的EC₅₀（20pM），另外，它们的体内稳定性也较差，因此，不能满足成药条件。然而，这些肽序列的发现却为后续研究起到了指导作用。

为了克服现有短肽的不足，本发明通过非天然氨基酸的引入，提供了一种生物活性好，成药性更好的促红细胞生成素模拟肽及其可用盐以及它们的制备方法和用途。

发明内容

本发明的目的在于提供一类促红细胞生成素模拟肽，有助于开发肾性贫血治疗药物及制剂。本发明人发现，在Exendin-4中引入含有特定的，如非天氨基酸残基，使其获得EPO受体激动活性，进而利用非天然氨基酸抗酶解能力为获得良好的体内行为提供了可能。

本发明要解决的问题是获得具有EPO受体激动活性的活性肽，提供一种引入非天然氨基酸对抗体内生物学降解并仍然保持EPO受体激动活性的方法以及相应的促红细胞生成素模拟肽。本发明人令人惊奇地发现，对肽链中的个别氨基酸替换为非天然氨基酸，得到促红细胞生成素模拟肽，这些促红细胞生成素模拟肽具有良好的EPO受体激动活性。而且，本发明人发现，本发明获得的新结构模拟肽，具有明显的升高红细胞的能力。本发明基于上述发现而得以完成。

本发明的第一方面涉及式(I)所示的模拟肽或其可药用盐，

其中，

Cys－Cys形成分子内二硫键；