[发明专利]一种约氏乳杆菌及其制剂与应用

说明书

【技术领域】

本发明属微生物领域，特别涉及一种约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）ZLJ010菌株及其制剂在畜禽微生物饲料添加剂中的应用。

【背景技术】

在养猪生产中，母猪占有很重要的地位，母猪的健康状况和繁殖性能直接影响猪场的生产水平和经济效益。有资料分析，每头母猪年提供仔猪的数量越多，仔猪分摊的母猪生产成本就越低，年提供16头仔猪的生产成本，要比提供22头仔猪的多52%。因此，通过技术创新，提高母猪的繁殖性能具有重要意义。若有针对性地研发出高效益生菌制剂，调控好母猪肠道菌群平衡，促进饲料营养的吸收和新陈代谢，减少粪便中有害菌的排出量，就有可能提高胎儿及哺乳仔猪的成活率和增重速度，从而提高母猪的窝产仔数、窝断奶头数及断奶窝重等繁殖指标。

但目前国内外关于益生菌的研究与应用多集中在仔猪上，很少见在母猪上的研究与报道。而实际生产中，母猪承担着复杂而繁重的繁殖仔猪任务，再加之当前的集约化饲养方式限制了母猪的自由活动，很容易引起母猪肠道菌群失调、免疫力下降、体况变差、出现便秘和厌食等情况，严重者还影响母猪下一个繁殖周期的生产；另外，新生仔猪通过母猪产道、采食母乳、环境接触等在肠道内定植多种菌群，如果母猪肠道菌群失调，会有大量的有害菌随粪便排出，这就增加了仔猪接触有害菌的几率，进而影响哺乳仔猪的身体健康和增重速度。

约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）是乳酸杆菌属（Lactobacillus）中的种群之一，是安全级（generally regarded as safe,GRAS）的有益菌。张凤华等从小鸡肠道中分离出一株约氏乳杆菌（HN/0711），但没有报道其特性；孙晓雯等从猪粪中分离到一株约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii Sun001），发现该菌在pH2.5的模拟胃液中处理3h，存活率仅为68.8%；苗玉和等从仔猪肠道中分离到一株约氏乳杆菌（LY7株），发现该菌在37℃、pH 5.7、接种量2%、培养18h后的活菌数达到4.7×10⁸CFU/mL；申请号为201110416416.8，发明名称为约氏乳杆菌及其菌剂、应用和预混料中公开了以约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短小芽孢杆菌制成的混合菌剂在仔猪饲养中的应用。显然这些研究还是初步的，如何制备出能够在母猪养殖生产中效果好且使用方便的益生菌制剂，尚需要进一步研究。

【发明内容】

本发明针对母猪饲喂，提供了一种可培养、生长好，且具有较强的产酸、耐酸、耐热及具有抑菌作用的约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）ZLJ010，同时对其培养基、冻干制剂和生产工艺进行优化。

本发明提供了一种约氏乳杆菌ZLJ010菌株，其微生物保藏编号为：CGMCC No.5762。

所述约氏乳杆菌ZLJ010具有以下特性：

①在35℃下培养16h后，进入生长稳定期；

②在35℃下培养30h后，pH达到3.85；

③在人工胃液及人工肠液中处理2～4h，活菌数在10⁹CFU/mL以上；

④在65℃下处理30～60s，存活率在70.9%以上。

约氏乳杆菌ZLJ010在制备抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌药物或试剂中的用途。

约氏乳杆菌ZLJ010的培养基：

蔗糖20g、大豆蛋白胨20g、牛肉膏20g、酵母浸粉7.5g、无水乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、K₂HPO₄·3H₂O 2g、MgSO₄·7H₂O 0.58g、MnSO₄·H₂O 0.19g、吐温-801mL、蒸馏水1000mL。

一种约氏乳杆菌冻干制剂，包括约氏乳杆菌ZLJ010和冻干保护剂。

所述约氏乳杆菌冻干制剂的优化方案为：

脱脂乳15.70g、海藻糖7.68g、L-半胱氨酸1.60g、乳糖4g、L-赖氨酸0.5g、谷氨酸钠1g、糊精5g、甘油1mL、蒸馏水100mL。

约氏乳杆菌冻干制剂的制备方法，包括如下工艺步骤：

①菌种活化：将于-70℃下保存的约氏乳杆菌ZLJ010以1%的接种量接种于液体培养基中，在35℃下培养18h后，为一级种子液；一级种子液再以1%的接种量接种于液体培养基中，于35℃下培养18h，为二级种子液，待用；