[发明专利]促进兰科石斛属植物种子萌发的一株真菌

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体地说涉及两株能够促进兰科石斛属植物种子萌发，用于石斛属植物的繁殖、生产，保护该属植物资源的真菌。 

背景技术

兰科(Orchidaceae)是被子植物的大科之一，全世界约有700属近20000种，其中很多为珍稀濒危植物。所有野生兰科植物均被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约》的保护范围，占该公约应保护植物的90％以上，是植物保护中的“旗舰”类群。石斛属是兰科第二大属，其中很多品种具有很高的药用及观赏价值。据2005年版《中华人民共和国药典》一部载：以金钗石斛(Dendrobium nobile LindL.)、铁皮石斛(D.candidum Wall，ex Lind1.)或马鞭石斛(D.fimbriatum Hook，var.oculatum Hook.)及其近似种的新鲜或干燥茎做石斛药用，具有益胃生津、滋阴清热、明目利嗓等作用。20世纪70年代以来，石斛的需求量大增，特别是石斛夜光丸、脉络宁注射液等中成药的问世，野生石斛资源已不能满足需求。由于生态环境日益恶化和过度开采，铁皮石斛等名贵品种已濒临灭绝，市场上的混淆品、假冒伪劣产品屡禁不止，因此加强石斛种质资源的研究迫在眉睫。 

对兰科植物繁殖方法的研究，主要有有性繁殖和无性繁殖两种。在无性繁殖方面，利用组织培养的方法进行大规模克隆繁殖，无疑可以减轻对野生石斛的采集压力，但是，组培苗经过多次继代会出现减产降质的退化现象，容易产生病害，降低产量和质量。在有性繁殖方面，研究者通过控制营养、生态等条件，促进兰科植物种子萌发与生长，已取得了较理想的结果，目前已经有一些石斛属植物可以通过种子的无菌萌发大量获得幼苗。但这种繁殖方式存在的主要问题是：种子萌发后形成的幼苗比较脆弱，从组织培养的条件移栽到大田环境继续生长时，有许多难以克服的困难。兰科植物的种子微小，本身无法贮存养分，其萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供营养。基于兰科植物种子萌发阶段依赖于真菌的特点，研究促进兰科植物种子萌发的优良真菌菌株(俗称萌发菌)的工作就显得尤为重要。 

发明内容

本发明的目的在于提供两株能促进兰科石斛属植物种子萌发的真菌。它们能用于多种珍稀濒危的药用石斛属植物的人工繁殖和生产中，提高石斛的产量，解决石斛药用资源紧缺的 问题，也能用于石斛属植物中名贵的观赏花卉的种质资源保育，保护石斛属植物的自然资源，具有巨大的应用价值。 

本发明提供的2株真菌经鉴定分别为：胶膜菌属真菌pw-3(Tulasnella sp.)，保藏编号CGMCC No.3397；蜡壳菌属真菌shh-53(Sebacina sp.)，保藏编号为CGMCC No.3398。这2株真菌于2009年11月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所。 

两株真菌的培养特性分别为： 

pw-3：在PDA培养基上菌落为白色，圆形，气生菌丝不发达，25℃生长10天的菌落直径为1.9厘米，常规培养基上不产生孢子。 

shh-53：在PDA培养基上菌落为黄色，圆形，气生菌丝不发达，25℃生长10天的菌落直径为3.8厘米，常规培养基上不产生孢子。 

具体实施方式

实施例1 

pw-3对铁皮石斛种子的萌发效果 

把铁皮石斛种子播种到已经长满pw-3真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。兰科植物种子发育级别划分标准如表1。结果为：接种pw-3真菌的铁皮石斛种子萌发率为69.3％，不接真菌的铁皮石斛种子萌发率为24.6％；并且接种pw-3真菌的铁皮石斛萌发到第4级，即分化出叶，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。 

表1 兰科种子发育级别分级标准 

实施例2 

pw-3对金钗石斛种子的萌发效果 

把金钗石斛种子播种到已经长满pw-3真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。结果为：接种pw-3真菌的金钗石斛种子萌发率为56.6％，不接真菌的金钗石斛种子萌发率为31.7％；并且接种pw-3真菌的金钗石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。 

实施例3