[发明专利]一种单链抗体及其在检测β-兴奋剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单链抗体及其在检测β-兴奋剂中的应用。

背景技术

β-兴奋剂(β-agonist)全称β-肾上腺素受体激动剂(β-adrenoceptor agonist)，是一类化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙胺类药物(phenethylamines，PEAs)。常见的β-兴奋剂为克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。

根据苯环取代基，可将PEAs分为苯胺型和苯酚型：苯胺型PEAs结构中具有芳伯胺基，中等极性；苯酚型PEAs一般具有邻(间)苯二酚或苯酚结构。β-兴奋剂能选择性地与细胞膜上的β-肾上素受体结合，起到调节交感神经兴奋、松弛气管平滑肌的功能，因此在临床上常用于人和动物哮喘类病症的治疗。当β-兴奋剂用量为临床用量的5-10倍时，能够影响营养物质在动物体内的流向和重新分配，使体内的脂肪分解代谢增强、蛋白质合成和骨骼肌合成增加，并减少脂肪组织，显著提高瘦肉率。最早被用于提高动物瘦肉率的β-兴奋剂是克伦特罗，但随着世界范围内对其禁用，莱克多巴胺、沙丁胺醇等成为克伦特罗最常用替代品。

β-兴奋剂残留会聚集在动物可食用组织中，由于其口服活性，一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒战等症，特别对患有“富贵病”等症的病人及免疫力较低的老人和儿童危害更大，甚至会导致死亡。

自从1998年香港发生第一起“瘦肉精”中毒事件后，近二十年来，我国因非法添加β-兴奋剂而导致的食物中毒事件屡见不鲜。国外也常有相关食物中毒事件的报道。目前包括我国在内的许多国家都不允许β-兴奋剂用于食用动物的促生长。我国农业部发布的《关于严禁非法使用兽药的通知》中，明令禁止将β-兴奋剂等药物作为饲料添加剂使用。然而，在经济利益的驱使下，我国部分地区的饲料加工企业和养殖场频繁使用，屡禁不止。瘦肉精事件已引起社会广泛关注，成为严峻的食品安全问题。目前，国内外均对β-兴奋剂做出了严格的残留限量规定。克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等几种重要的药物禁止使用于畜牧业，在畜产品中不得检出。

β-兴奋剂残留的主要检测方法有色谱法、免疫分析法、毛细管电泳法及电化学法等。色谱法包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用法(GCMS)、液质联用法(LC-MS)。免疫分析法包括酶联免疫法、胶体金免疫法、时间分辨免疫荧光测定等。其中，免疫分析方法最为快速、经济，但目前应用于免疫检测的抗体主要是多克隆抗体和单克隆抗体，大部分为针对克伦特罗的抗体，而对于沙丁胺醇和其他β-兴奋剂的抗体的制备研究均处起步阶段，因此，尚无成熟的β-兴奋剂多残留免疫检测技术出现。

发明内容

本发明的目的是提供一种单链抗体及其在检测β-兴奋剂中的应用。

本发明提供的单链抗体，是由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成的多肽；所述连接肽位于所述重链可变区与所述轻链可变区之间；所述重链可变区如序列表的序列1自N末端第1至122位氨基酸残基所示；所述轻链可变区如序列表的序列1自N末端第143至251位氨基酸残基所示。

所述连接肽可如序列表的序列1自N末端第123至142位氨基酸残基所示。

所述单链抗体具体可为序列表的序列1所示的多肽或序列表的序列4所示的多肽。

本发明还保护编码所述单链抗体的基因，由所述重链可变区的编码序列、所述连接肽的编码序列和所述轻链可变区的编码序列组成。

所述重链可变区的编码序列可如序列表的序列2自5’末端第9至374位核苷酸所示。所示轻链可变区的编码序列可如序列表的序列2自5’末端第435至761位核苷酸所示。

所述连接肽的编码序列可如序列表的序列2自5’末端第375至434位核苷酸所示。

所述基因具体可为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列2自5’末端第9至761位核苷酸所示的DNA分子；（b）序列表的序列2自5’末端第9至800位核苷酸所示的DNA分子。

所述基因具体可为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列2自5’末端第9至752位核苷酸所示的DNA分子；（b）序列表的序列2自5’末端第9至791位核苷酸所示的DNA分子。

含有所述基因的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系均属于本发明的保护范围。