[发明专利]具有1,2,3-三氮唑结构的抗登革热病毒杂环肽类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明是关于利用点击化学合成治疗登革热病毒(DENV)感染的式(A)化合物、药物组合物，以及这类化合物的合成方法、制剂方法和用于这些合成中的化合物。具体地，本发明提供一类具有1，2，3-三氮唑结构的杂环肽类化合物，含有这类化合物的药物组合物及这类化合物治疗登革热病毒感染的方法。

发明背景

登革热(dengue fever)是由登革热病毒(dengue virus，DENV)引起、伊蚊作为传播媒介的一种传染病，主要分布在热带和亚热带地区。其特点为急性起病，发热，全身肌肉、骨、关节痛，极度疲乏，皮疹，淋巴结肿大及血液白细胞、血小板减少。临床上最常见的是类似感冒的急性高热，少数病例会发展为突发性出血-登革出血热(dengue haemorrhagic fever)，最严重的发展为以循环衰竭为特征的登革休克综合症(dengue shock syndrome)。

近年来，由于全球环境的恶化和气候变暖，登革热发病率在全球大幅度上升，占世界五分之二的人口面临罹患登革热危险。2008年，NIH将登革热列为严重危害公共健康的危险性疾病。世卫组织估计全球每年有超过5000万的感染病例，其中50万人发展为严重的登革出血热和登革休克综合症。我国登革热疫情主要流行于东南沿海地区，因其症状严重、死亡率高，按照《中华人民共和国传染病防治法》的规定将其列为乙类传染病。随着登革热的发病机制的不断深入研究，针对登革热病毒的疫苗，小分子药物以及抗体的研究开发不断地见诸于报道，但临床上尚未研制有效的疫苗可以预防登革热，也没有特效的药物治疗登革热。因此，需要发展可用来治疗登革热病毒感染的有效药物。

登革热病毒的直径约为40-60nm，是具有包膜的单股正链RNA病毒，在病毒学上与日本脑炎病毒、黄热病毒、西尼罗病毒等都属于黄病毒科黄病毒属。已知的登革热病毒依抗原性不同分为4个血清型，其中2型最为广泛。登革热病毒具有一个开放读码框，编码长为3000-3500个氨基酸残基的多聚前体蛋白，进一步酶解成为具有不同功能的蛋白，包括三个结构蛋白(核蛋白C，膜结合蛋白preM和包膜蛋白E)和七种非结构蛋白(NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5)。登革热病毒NS3蛋白酶结构区域(NS3protease domain，NS3pro)位于NS3蛋白的N端1/3区，属于丝氨酸蛋白酶家族，由180个氨基酸组成。丝氨酸蛋白酶(serineprotease)与其辅助因子NS2B形成异源二聚体复合物发挥蛋白酶活性，可以切割NS2A/NS2B，NS2B/NS3，NS3/NS4A，NS4B/NS5连接位点及核蛋白C，NS2A，NS3，NS4A分子内的切割位点。切割点的P2-P1位残基通常为Lys-Arg，Arg-Arg，Arg-Lys，少数情况下为Gln-Arg。丝氨酸蛋白酶在病毒多聚蛋白转录及水解过程中扮演了一个重要的角色，干扰其蛋白酶活性，将破坏登革热病毒的生长、繁殖。

发展抗病毒药物的一般策略是钝化(inactive)主要用于病毒复制的病毒编码的酶。因而，登革热病毒丝氨酸蛋白酶为针对性开发具有高效、低毒的抗登革热小分子靶向药物提供了机会；以丝氨酸蛋白酶为靶点，设计和开发小分子酶抑制剂，引起了广泛的关注。

登革热病毒NS2B-NS3pro复合物的晶体结构(PDB：2FOM)于2006年被报道，成功地完成第一个活性登革热蛋白酶的单晶衍射结构图的测定工作，并且解析了四肽醛抑制剂和西尼罗病毒丝氨酸蛋白酶复合物的晶体结构；2011年底报道了四肽醛抑制剂Bz-nKRR-H和登革热病毒丝氨酸蛋白酶复合物的晶体结构(PDB：3U1I)。NS3pro具有丝氨酸蛋白酶常见的催化活性区域，这一催化部位由His51，Asp75和Ser135构成。His51在丝氨酸蛋白酶水解底物时起碱性催化作用，可以吸引Ser135γ羟基上的氢原子，促使Ser135成为一个很强的亲核试剂，进攻底物肽键的羰基碳原子，成为四面体形式的过渡态；同时Asp75羧基上的氧原子与His51咪唑环上的氢原子形成氢键，有助于过渡态的稳定。丝氨酸蛋白酶活性依赖于NS2B，NS2B激活的丝氨酸蛋白酶活性比单独的蛋白酶切活性提高数千倍。因此可被特异性识别的选择性小分子抑制丝氨酸蛋白酶的作用是治疗登革热病毒感染的有效手段，丝氨酸蛋白酶成为治疗登革热病毒引起的疾病的重要药物靶点。

本发明基于登革热病毒丝氨酸蛋白酶的晶体结构特征，利用点击化学合成的方法构建含有1，2，3-三氮唑结构的杂环肽衍生物类丝氨酸蛋白酶抑制剂。