[发明专利]重组二聚化抗凝血酶III-Fc融合蛋白及其哺乳动物细胞高效表达系统

权利要求书

1.一种重组二聚化hAT-L-vFc融合蛋白，其特征在于所述的融合蛋白从N端到C端依次含有人AT、肽接头和人IgG Fc变体，

并且所述的人IgG Fc变体选自下组：

(i)含有Pro331Ser突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(ii)含有Ser228Pro和Leu235Ala突变的人IgG4绞链区、CH2和CH3区域；

(iii)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突变的人IgG1绞链区、CH2和CH3区域。

2.如权利要求1所述的重组hAT-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述的肽接头含有2-20个氨基酸，所述肽接头存在于人AT和人IgG Fc变体之间；且所述的肽接头含有两个或更多选自甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸和苏氨酸的氨基酸，优选序列为GlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySer。

3.如权利要求1所述的重组hAT-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、4或6所示。

4.如权利要求1所述的重组hAT-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列是去除了1到38位氨基酸残基的hAT前导肽之后的SEQ ID NO：2、4或6所示的氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的重组hAT-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述的hAT-L-vFc融合蛋白在摩尔基础上，具有与rhAT类似或更高的体外生物活性、更长的半衰期。

6.一种编码根据权利要求1-5任意一项权利要求所述的重组二聚化hAT-L-vFc融合蛋白的DNA序列，特征在于该DNA序列具有SEQ ID NO：1、3或5所示的DNA序列。

7.一种载体，该载体包含具有SEQ ID NO：1、3或5所示的DNA序列。

8.一种CHO衍生细胞株，其特征在于，其含有编码hAT-L-vFc融合蛋白的DNA序列，并且所述的DNA序列具有SEQ ID NO：1、3或5所示的核苷酸序列，所述细胞株在其生长培养基中在每24小时内，产生超过50μg/百万个细胞的如权利要求1-5任一所述的重组hAT-L-vFc融合蛋白。

9.一种制备权利要求1所述重组hAT-L-vFc融合蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)将编码重组二聚化hAT-L-vFc融合蛋白的DNA引入CHO细胞，生成CHO衍生的细胞系；

(b)培养这种CHO衍生的细胞系，从而表达重组hAT-L-vFc融合蛋白；和

(c)纯化步骤(b)表达的重组hAT-L-vFc融合蛋白，

所述的编码重组hAT-L-vFc融合蛋白的DNA具有SEQ ID NO：1、3或5所示的核苷酸序列，

所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、4或6所示。

10.一种药物组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂，以及有效量的权利要求1-5任意一项权利要求所述的hAT-L-vFc融合蛋白。

11.权利要求10的药物组合物在制备预防和治疗AT先天性或获得性缺乏症患者的出血性疾病以及血友病A或B患者的自发或手术性出血疾病药物中的应用。