[发明专利]一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品综合利用领域，具体涉及一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法。

背景技术

由于林蛙皮具有较强的修复能力和韧性，并且即使死亡也几十年不腐，因此引起了诸多学者的兴趣，研究认为这与林蛙皮含有大量抗菌活性物质和大量胶原蛋白有关，其中蛙皮胶原蛋白含量在26％-48％之间。多数研究集中于林蛙皮抗菌活性物质的研究，而关于蛙皮胶原蛋白的研究较少。胶原海绵是胶原液经发泡、固化、冻干和灭菌而制成的一种海绵状固体制剂，由于胶原具有优越的生物相容性和安全性、生物可降解性和弱抗原性，使得它成为最优越的生物医学材料。从林蛙残皮(提取完抗菌活性物质)制备胶原海绵可促进林蛙综合利用，提高林蛙附加值。

发明内容

本发明的目的是提供一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法。该方法工艺简单，适合工业化生产。所述方法包括：干燥、酸酶提取、酶灭活、纯化和冻干。

干燥：经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥。

酸酶提取：在冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶和蛙皮残渣提取胶原蛋白。

酶灭活：加入EDTA灭活蛋白酶。

纯化：抽滤获得滤液，盐析沉淀，蒸馏水透析过夜。

冻干：将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射，冷冻干燥，获得胶原海绵。

具体实施方式

实施例1

干燥：经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥(35℃)。

酸酶提取：在50ml冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶20mg和蛙皮残渣1g，37℃提取48h。

酶灭活：加入20mM EDTA灭活蛋白酶。

纯化：抽滤获得滤液，加入硫酸铵5mg，蒸馏水透析过夜。

冻干：将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射254nm，工作距离5cm，辐照时间4h，冷冻温度-40℃冷冻干燥，获得胶原海绵。

实施例2

干燥：经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥(40℃)。

酸酶提取：在200ml冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶80mg和蛙皮残渣4g，37℃提取48h。

酶灭活：加入20mM EDTA灭活蛋白酶。

纯化：抽滤获得滤液，加入硫酸铵20mg，蒸馏水透析过夜。

冻干：将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射365nm，工作距离10cm，辐照时间3h，冷冻温度-40℃冷冻干燥，获得胶原海绵。