[发明专利]一种新的单克隆抗体的制备方法及用途

权利要求书

1.一种筛选单克隆抗体的方法，包括：

(1)提供构建物1，该构建物1包括：表达盒1，其包括启动子1、生物素连接酶BirA编码基因、终止子1；和表达盒2，其包括启动子2、AviTag编码基因、抗原编码基因、终止子2；

将构建物1转染哺乳动物细胞，表达获得生物素化的抗原，裂解细胞获得含有生物素化抗原的裂解液；

(2)提供构建物2，该构建物2包括：表达盒3，其包括启动子3、信号肽编码基因、GM-CSF编码基因、终止子；和表达盒4，其包括启动子4、信号肽编码基因、抗原编码基因；

将构建物2免疫哺乳动物，取哺乳动物脾脏细胞制备杂交瘤细胞；

(3)将步骤(1)获得的含有生物素化抗原的裂解液与包被有亲和素的固相载体接触，从而生物素化的抗原被固定于固相载体；以该生物素化的抗原来筛选步骤(2)获得的杂交瘤细胞分泌的抗体，获得特异性抗所述抗原的单克隆抗体。

2.一种制备生物素化抗原的方法，包括：

提供构建物1，该构建物1包括：表达盒1，其包括启动子1、生物素连接酶BirA编码基因、终止子1；和表达盒2，其包括启动子2、AviTag编码基因、抗原编码基因、终止子2；

将构建物1转染哺乳动物细胞，表达获得生物素化的抗原。

3.一种制备抗体的方法，包括：提供构建物2，该构建物2包括：表达盒3，其包括启动子3、信号肽编码基因、GM-CSF编码基因、终止子；和表达盒4，其包括启动子4、信号肽编码基因、抗原编码基因；

将构建物2免疫哺乳动物，获得哺乳动物的免疫血清，其中包括抗所述抗原的多克隆抗体；或将构建物2免疫哺乳动物，获取哺乳动物的脾脏细胞，制备单克隆抗体。

4.一种评估抗体的效价的方法，包括：

提供构建物1，该构建物1包括：表达盒1，其包括启动子1、生物素连接酶BirA编码基因、终止子1；和表达盒2，其包括启动子2、AviTag编码基因、抗原编码基因、终止子2；

将构建物1转染哺乳动物细胞，表达获得生物素化的抗原，裂解细胞获得含有生物素化抗原的裂解液；

将获得的含有生物素化抗原的裂解液与包被有亲和素的固相载体接触，从而生物素化的抗原被固定于固相载体；以该生物素化的抗原来评估特异性抗该抗原的抗体的效价。

5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，表达盒1中，在启动子1与生物素连接酶BirA编码基因之间，还包括KOZAK基因；或

表达盒2中，在启动子2与AviTag编码基因之间，还包括KOZAK基因和/或纯化标签编码基因；或

表达盒3中，在启动子3与信号肽编码基因之间，还包括KOZAK基因；或

表达盒4中，在启动子4与信号肽编码基因之间，还包括KOZAK基因。

6.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的生物素连接酶BirA编码基因具有SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列；或。

所述的AviTag具有SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列；或

所述的GM-CSF编码基因具有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；或

所述的信号肽是人IgE重链信号肽；更佳地，所述的IgE重链信号肽具有SEQ ID NO：3中第16-69位所示的核苷酸序列；或

所述的KOZAK基因具有SEQ ID NO：中第7-15位所示的核苷酸序列；或

所述的纯化标签是Flag标签；更佳地，所述的Flag标签编码基因具有SEQID NO：10所示的核苷酸序列。

7.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的抗原是刺激哺乳动物免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物在体内外发生特异性结合的物质；较佳地，所述的抗原选自：病毒蛋白，细菌蛋白；更特别地，所述的病毒蛋白包括：汉滩病毒来源的蛋白，波马拉病毒来源的蛋白，流感病毒来源的蛋白，禽流感病毒来源的蛋白，疱疹病毒来源的蛋白，猪瘟病毒来源的蛋白，黄病毒来源的蛋白，乙肝病毒来源的蛋白，呼吸道合胞病毒来源的蛋白；所述的细菌蛋白包括：幽门螺杆菌来源的蛋白，念珠菌来源的蛋白，鼠疫菌来源的蛋白，霍乱菌来源的蛋白。

8.一种DNA疫苗，包括：表达盒3，其包括启动子3、信号肽编码基因、GM-CSF编码基因、终止子；和表达盒4，其包括启动子4、信号肽编码基因、抗原编码基因。