[发明专利]基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析、体外诊断技术领域，涉及丙型肝炎病毒的检测，尤其是涉及一种基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法。

背景技术

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)是上世纪70年代出现的一种非甲非乙型肝炎，1989年被鉴定为丙型肝炎病毒。感染呈世界性分布，全球有约2.7-3亿丙肝患者。我国HCV感染属中高流行区，是一个严重影响人群健康的公共卫生问题，全国有约4,000万HCV携带者，平均感染率高达3.2％。HCV慢性感染导致肝脏发生慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可能会发展成肝硬化，严重者可发展成肝癌，及时准确快速地检测HCV病毒对于疾病的诊断、治疗和监控具有十分重要的临床应用意义。

实验室检测HCV的方法主要有两类：血清分析和核酸分析。目前，血清分析仍是普遍使用的方法，常用检测方法是酶联免疫分析方法(Enzyme Immunoassay，EIA)检测血清中HCV抗体和抗原。根据检测靶标分子的不同，目前已经发展了三代检测HCV的诊断试剂，第一代HCV血清诊断方法使用标准的酶联免疫分析(ELISA)技术，用c100-3抗原检测血清中HCV病毒NS4位点的抗体，因而第一代HCV诊断方法主要用于降低感染输血型HCV的风险，但仍有较长的窗口期；第二代诊断方法在c100-3抗原检测靶向HCV病毒NS4位点抗体的基础上，增加了分别靶向HCV病毒NS3位点的抗体和核心抗原，特别是HCV核心抗原的检测可以将HCV的检测“窗口”期平均缩短约5周；第三代诊断试剂，所用核心抗原比例下降，而增加了检测靶向NS3位点抗体的c33c抗原的比例，去掉了特异性和灵敏性较差的的c100-3抗原，增加了检测靶向HCV病毒NS5位点抗体的抗原，提高了抗原的纯度。第二、三代HCV诊断试剂中都使用了多种HCV标志物检测，而传统的多元检测技术具有操作繁琐，劳动强度大，结果重复性差，易发生交叉感染，样本需求量大等缺点，限制了其在临床诊断上的应用。

量子点(Quantum Dots，QDs)通常指粒径小于或接近激子玻尔半径的半导体纳米晶粒，由于量子限域、尺寸效应和表面效应等，量子点具有许多独特的荧光性能，如发射波长的尺寸依赖性，激发光波长范围广，斯托克斯位移大等，与有机荧光染料相比还具有荧光强度强、灵敏度高和光漂白速率慢等特点。用量子点代替有机荧光染料制备编码微球，多色发射光谱不出现重叠或只有很小程度的重叠，单色激发光即可同时激发多色量子点发射荧光，因此大大提高了荧光编码的能力，得到更多种类的荧光微球；理论上使用6种不同颜色的荧光量子点，每种10个荧光强度，这样就可以得到10⁶-1种微球，基本上可以满足同时检测大量生物分子的需要。由于量子点可用单色光同时激发多色量子点，使用常见的流式细胞仪就可以检测，无需特殊的芯片分析仪器，具有更强的应用灵活性。

基于微球的免疫诊断试剂是一种新型诊断技术，该方法原理上与传统ELISA方法类似，将捕获分子固定在微球载体上，捕获样品中待测分子至微球表面，然后使用报告分子的信号检测微球上待测分子的数量。具有操作简便、反应动力学优良、分辨率高、灵敏度高和稳定性好等优点。有文献报道使用微球或者磁性微球建立丙型肝炎诊断试剂盒，其具有灵敏度高、特异性好、稳定性好等优点。但目前使用的微球诊断试剂只能检测单一指标，尤其丙肝病毒诊断需要检测多元指标。为此，人们进行了长期的探索，但均未能获得较为理想的进展。

发明内容

本发明目的是针对上述问题，提供一种能够提高丙型肝炎的诊断准确率、缩短检测窗口期、降低检测试验强度和减少样本需求量的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法。

为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，本方法包括下述步骤：

S1：在不同颜色的量子点编码微球表面偶联不同的HCV抗体和/或抗原；

S2：将步骤S1得到的一种或者多种量子点编码微球加入待测样品中孵育，富集待测样品中的HCV抗原和/或抗体至量子点编码微球表面；

S3：将荧光抗体与步骤S2得到的量子点编码微球混合免疫杂交；

S4：检测步骤S3得到的量子点编码微球的荧光信号，并检测量子点编码微球表面报告分子的荧光信号强度；

S5：根据量子点编码微球表面报告分子的荧光信号强度进行定性检测和/或定量检测。