[发明专利]基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法

权利要求书

1.一种基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，本方法包括下述步骤：

S1：在不同颜色的量子点编码微球表面偶联不同的HCV抗体和/或抗原；

S2：将步骤S1得到的一种或者多种量子点编码微球加入待测样品中孵育，富集待测样品中的HCV抗原和/或抗体至量子点编码微球表面；

S3：将荧光抗体与步骤S2得到的量子点编码微球混合免疫杂交；

S4：检测步骤S3得到的量子点编码微球的荧光信号，并检测量子点编码微球表面报告分子的荧光信号强度；

S5：根据量子点编码微球表面报告分子的荧光信号强度进行定性检测和/或定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，上述的步骤S1包括下述步骤：

a、将量子点编码微球分散在磷酸盐缓冲液中，量子点编码微球浓度为10⁴-10⁶个/mL，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酸亚胺，二者浓度分别为0.1-100μM和0.2-200μM，然后在室温孵育10-90分钟；

b、将量子点编码微球悬浮液3000-10000rpm离心，弃去上清，加磷酸盐缓冲液洗涤，然后加入浓度0.1-1mg/mL的HCV抗体和/或抗原，室温下孵育0.5-2小时；

c、然后加入浓度0.1-10mg/mL的牛血清蛋白封闭量子点编码微球表面，室温下继续孵育0.5-2小时，再将量子点编码微球悬浮液3000-10000rpm离心，弃去上清，加磷酸盐缓冲液洗涤。

3.根据权利要求2所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，所述的步骤b中，加入的抗体和/或抗原分子包括HCV核心抗体、NS3、NS4和NS5区特异性抗原中的一种或者多种。

4.根据权利要求2所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，所述的待测样品包括：阴性对照血清和阳性对照血清，所述的阴性对照血清为非丙型肝炎患者混合血清，所述的阳性对照血清为经确定的HCV抗体和/或抗原血清。

5.根据权利要求1或2或3或4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，所述的量子点编码微球基质材料为聚苯乙烯、二氧化硅、聚甲基丙烯酸甲酯或三聚氰胺甲醛中的一种，粒径0.5-50微米。

6.根据权利要求1或2或3或4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，所述的量子点编码微球中的量子点包括CdSe、CdTe、CdS量子点，以及CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe核壳量子点。

7.根据权利要求1或2或3或4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，上述的步骤S3中的荧光抗体为羊、鼠、兔抗人免疫球蛋白抗体或者抗-HCV核心抗体，且荧光抗体分子的荧光发射峰与量子点编码微球的荧光发射峰不重叠。

8.根据权利要求1或2或3或4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，上述的步骤S4中，使用荧光显微镜或者流式细胞仪检测量子点编码微球的上的荧光信号，根据量子点编码微球报告分子的荧光信号确定量子点编码微球种类，根据报告分子荧光信号强度确定待测样品中HCV抗体和/或抗原浓度。

9.根据权利要求4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，上述的步骤S5中，定性检测用阴性对照血清、阳性对照血清为参照，根据待测样品的报告分子荧光强度进行定性判断，当强度大于等于阴性对照血清检测值的2.1倍时为阳性，当强度小于阴性对照血清检测值的2.1倍时为阴性；定量检测用一组已知浓度的阳性对照血清制作标准曲线，然后对待测样本进行定量分析。

10.根据权利要求1或2或3或4所述的基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，每种量子点编码微球表面包被一种HCV探针，使用多种量子点编码微球混合物与待测样品混合孵育，同时检测待测样品中的多个HCV指标。