[发明专利]一种快速检测甲型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，具体地，本发明涉及一种用胶体金层析捕获法检测人血清、体液或其它样本中的甲型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲型病毒性肝炎(简称甲肝，HA)是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的一种肠道传染病，以肝实质细胞炎性损伤为主，传染性强，发病率高，容易发生食物型和饮水型的爆发与流行，迄今仍是全世界普遍的公共卫生问题，全球年发病人数约140万，实际病例则是报告数的3至10倍。目前我国甲肝的发病率和感染率仍居其它各型病毒性肝炎首位，全国90年代初开展的病毒性肝炎血清流行病学调查结果显示，我国抗-HAV IgG总流行率为80.9％，表明预防控制甲肝爆发与流行仍将是艰巨长期的工作，也是重要的研究课题。

我国甲型肝炎(甲肝)主要呈散发分布，但时有暴发或流行；约有9.7亿人已感染过HAV。我国甲型肝炎流行特点有：1、农村高于城市。5-15岁儿童感染率城市明显低于农村，但30岁以上感染曲线城市与农村呈平行状态。2、长江以北高于长江以南，西部地区高于中、东部地区。3、根据各省市流行率的分布状况显示，甲型肝炎发病或爆发流行仍以儿童为主。4、流行率明显与卫生习惯有关。

1988年，上海甲肝大流行，持续近1年，波及人数达31万。此事件因其发病人数多、影响深、经济损失重而震惊世界。

由于甲型肝炎临床表现复杂多样，有的甚至无症状，故给诊断带来一定困难，不但要参考接触史，所在地区甲型肝炎流行史、患者的症状和体征，而且还要作肝功能检查和血清学测定，后者尤其是确诊甲型肝炎的依据。

抗-HAV IgM是诊断甲型病毒性肝炎的一个重要指标。甲型肝炎病毒特异性抗体主要有两种，即IgM和IgG型的抗-HAV。抗-HAV IgM抗体在急性甲肝感染时出现较早(患者于发病后1～4周血清中即可检出HAV-IgM抗体)，上升较快，高峰滴度较高、滴度随时间推移而下降，但用敏感的免疫测定法，IgM可持续存在6～12个月，甚至达到18个月。所有患者发病早期体内均能查到抗-HAVIgM，而抗-HAV IgG是疾病恢复期才出现的一个指标，是甲型病毒性肝炎的保护性抗体。因此，检测病人血清中抗-HAV IgM是目前诊断甲型肝炎最可靠最灵敏的方法，可以明确诊断该病。

目前可用于抗-HAV IgM检测的方法有放射免疫(RIA)、酶联免疫(ELISA)、化学发光(CLIA)等。这些方法无一例外均为实验室方法，需要一定的标本量与检测时间，一般用于大量标本的同时检测，需要收集一定量的标本后，统一进行检测，在临床应用上一般需要1-5天发出检验报告。这就不利于急诊病例与流行病的控制。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种快速检测甲型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒。本发明所提供的检测试剂盒利用捕获法反应原理，并结合胶体金免疫层析技术。试剂盒包括抗人IgM、胶体金偶联的抗原抗体复合物以及支持性材料与质控反应系统。

其中，所述抗人IgM可以为羊抗人IgM，也可以为鼠抗人IgM。

所述胶体金偶联的抗原抗体复合物结构为[胶体金]-[抗体]-[抗原]，其中抗体为抗甲型肝炎病毒的单克隆或多克隆抗体。

本发明的技术方案为采用抗人IgM包被在检测线(T)上。病毒抗原抗体复合物与胶体金偶联并干燥后置于金标垫上。其中检测线的鼠抗人IgM是固化的，金标垫的抗原抗体复合物是可流动的。测试时，样本通过层析作用向上流动，样本中的抗体会与金垫上的抗原-胶体金偶联物结合，并被检测带上的抗人IgM捕获，形成的[鼠抗人IgM]-[血清抗体]-[抗原-抗体-胶体金]复合物，从而在检测线(T)显现出一条红色条带。如是阴性样本，则将无红色条带显现。

所述支持性材料包括吸水纸、硝酸纤维素膜、玻璃纤维、无纺布、聚酯纤维、底卡。吸水纸是加强层析作用，硝酸纤维素膜是用于制备固定相，玻璃纤维、无纺布与聚酯纤维是用于制备流动相与吸收样品，底卡则是支持性背衬。

为了方便进行产品质控控制，试剂盒还包括一个质控系统，由一对可以特异性反应的抗原抗体组成，其中一项与胶体金偶联后置于金标垫上，为流动相。另一项固化于质控线(C)，为固定相。在检测时，流动相溶解后向上层析，并被结合在质控线上。

所述质控系统的抗原抗体对可以选用鼠IgG-羊抗鼠，其中鼠IgG偶联胶体金后用于流动相，羊抗鼠用于固定相。

本发明的另一个目的是提供一种如上述的检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1.固相膜制备：用缓冲液将检测线划膜液(鼠抗人IgM)稀释至1-2mg/ml，