[发明专利]黄牛WNT10B基因的单核苷酸多态性位点及其检测方法

权利要求书

1.黄牛WNT10B基因单核苷酸多态性位点，其特征在于，该基因单核苷酸多态性包括：

黄牛WNT10B基因第220位点为A或G的单核苷酸多态性位点；和

第3980位点为G或T的单核苷酸多态性位点。

2.黄牛WNT10B基因单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、以包含WNT10B基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P1为引物，PCR扩增黄牛WNT10B基因获得第一扩增产物，并用限制性内切酶NaeI酶切第一扩增产物；

(2)、以引物对P3为引物，PCR扩增黄牛WNT10B基因获得第三扩增产物，并用限制性内切酶ApaI酶切第三扩增产物；

(3)、分别对步骤(1)和(2)酶切后的扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛WNT10B基因第220和3980位的单核苷酸多态性；

所述的引物对P1为：

上游引物F1：ggggaaactg aggcaaagag a；

下游引物R1：agcgggcaag cacagaact；

所述的引物对P3为：

上游引物F3：tcagacctac ccctatccacac；

下游引物R3：aaacgccagg aagacccag。

3.如权利要求2所述的黄牛WNT10B基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，步骤(1)中的PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性45s，66.0℃退火45s，72℃延伸45s，30～35个循环；72℃延伸10min；

步骤(2)中PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性45s，65.5℃退火45s，72℃延伸45s，30～35个循环；72℃延伸10min。

4.如权利要求2所述的黄牛WNT10B基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，所述的琼脂糖凝胶电泳所采用的琼脂糖凝胶的质量浓度为2.5％。

5.如权利要求2所述的黄牛WNT10B基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛WNT10B基因的单核苷酸多态性为：

第220位点为A或G的单核苷酸多态性，表现为AA、AG、GC三种基因型；和

第3980位点为G或T的单核苷酸多态性，表现为GG、GT、TT三种基因型。