[发明专利]一种长白山牛皮杜鹃基因组DNA提取的方法

权利要求书

1.一种长白山牛皮杜鹃基因组DNA提取的方法，其特征在于：该方法采用CTAB法与SDS法相结合，即首先采用CTAB法提取牛皮杜鹃基因组DNA，然后再采用SDS法纯化所提取的基因组DNA。

2.一种长白山牛皮杜鹃基因组DNA提取的方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：

（1）、CTAB法提取牛皮杜鹃基因组DNA：

向提取容器内加入CTAB提取缓冲液预热至65 ℃；将牛皮杜鹃新鲜叶片在研磨前加入?-巯基乙醇, 加入量为CTAB提取缓冲液体积的4.3%V/V，经液氮研磨成冻粉状后迅速加入到上述预热的CTAB提取缓冲液中，充分混匀；于 65 ℃温浴4小时；然后按常规方法提取出牛皮杜鹃基因组DNA；  

（2）、结合SDS法纯化所提取的基因组DNA：

向上述提取出的牛皮杜鹃基因组DNA溶液中加入1/10体积2%的SDS，冰浴10 分钟；加入1/10体积5 mol·L^-1 KAc，冰浴30 分钟；18 ℃下12,000 rpm离心10 分钟，取上清液；加入1/20体积2% 的 SDS，冰浴10 分钟；加入1/20体积5 mol·L^-1 KAc，冰浴30 分钟；离心，取上清液；酚氯仿抽提一次，取上清液；醇沉，洗涤沉淀，溶解沉淀即为纯化的牛皮杜鹃基因组DNA。

3.根据权利要求2所述的一种长白山牛皮杜鹃基因组DNA提取的方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：

 （1）、 CTAB法提取牛皮杜鹃基因组DNA：

取2.0 ml离心管，加入700 ul的CTAB提取缓冲液，65 ℃预热； 取新鲜幼嫩牛皮杜鹃材料0.3 g，研磨前加入30 ul ?-巯基乙醇，液氮中研磨成冻粉末状并迅速将该冻粉转入上述离心管中，充分混匀；水浴中65 ℃温浴4小时；然后按常规方法提取出牛皮杜鹃基因组DNA；

 （2）、结合SDS法纯化所提取的基因组：

向上述提取出的牛皮杜鹃基因组DNA溶液中加入1/10体积2%的SDS，冰浴10 分钟；加入1/10体积5 mol·L^-1 KAc，冰浴30 分钟；18 ℃下12,000 rpm离心10 分钟，取上清液；加入1/20体积2% 的 SDS，冰浴10 分钟；加入1/20体积5 mol·L^-1 KAc，冰浴30 分钟；离心，取上清液；酚氯仿抽提一次，取上清液；醇沉，洗涤沉淀，溶解沉淀即为纯化的牛皮杜鹃基因组DNA。

4.根据权利要求2或3所述的牛皮杜鹃基因组DNA提取的方法，其特征在于：所述的CTAB提取缓冲液是由：2% CTAB，100 mmol·L^-1 Tris-HCl pH 8.0, 20mmol·L^-1 EDTA，1.4 mol·L^-1 NaCl，4% PVP组成；所述的酚氯仿是苯酚与氯仿按1：1体积比配制而成。