[发明专利]一种基于表面等离子共振技术的食品中生物毒素检测方法

权利要求书

1.一种应用表面等离子体共振仪的食品中生物毒素检测方法，利用同一传感芯片对不同生物毒素的含量进行检测；其特征在于包括以下步骤：

（一）传感芯片表面适配体固定：选择链霉亲和素SA修饰的传感芯片，通过通入5-50μL浓度为1-50μg/L已标记生物素的标记分子探针适配体，在表面等离子体传感芯片上固定上标记分子探针适配体；

（二）对待测生物毒素进行分子探针标记，标记方法根据待测物基团不同，选择EDC/NHS法交联羧基与氨基或戊二醛法交联两个氨基；

（三）标准溶液配制：用0.01-0.1mol/L（pH＝7.4）的磷酸盐缓冲液配置生物毒素的标准样品储备液，储备液浓度为0.1ng/mL至1mg/mL，用磷酸盐缓冲液将储备液配制成不同浓度的标准溶液，取不同浓度未标记待测生物毒素的标准溶液和分子探针标记的待测生物毒素充分混合后，竞争结合生物毒素相应的适配体或纳米粒子修饰的适配体，其中分子探针标记的生物毒素量应不少于加入的适配体量；

（四）建立标准曲线：采用表面等离子共振谱仪测量，以0.02mol/L的磷酸盐缓冲液为测量基准，通过微泵通入5-100μL待测混合样品，记录下表面等离子体共振仪光谱图，通过检测分子探针的含量，间接检测生物毒素含量；取不同浓度待测样品的表面等离子体共振谱图稳定值，绘制工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得回归标准曲线；

（五）定量检测：对于未知含量的生物毒素样品进行检测，同样按照步骤（三）进行；采用表面等离子体共振检测仪记录生物毒素的光谱图；将光谱图中稳定值代入相应的回归曲线方程，计算出食品中生物毒素的浓度值；

（六）通入0.01-0.05mol/L（pH为2-3）的甘氨酸-盐酸缓冲溶液，冲洗传感芯片表面，进行传感元件再生，用于其它生物毒素的检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述分子探针包括凝血酶或溶菌酶或免疫球蛋白E，标记方法包括EDC/NHS法或戊二醛法。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用核酸适配体为识别分子，核酸适配体序列与待测物直接相关。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（一）传感器表面适配体固定，包括如下步骤：

（1）将链霉亲和素SA修饰的传感芯片插入表面等离子体共振检测仪中，在工作通道中进行在线传感表面修饰；

（2）通入0.02mol/L（pH＝7.4）的磷酸盐缓冲液；

（3）通入5-50μL浓度为1-50μg/L生物素修饰的分子探针适配体溶液，进行在线偶联至基线稳定；

（4）重复步骤（2）至（3），获得分子探针适配体修饰的传感芯片。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用分子探针标记待测物，与未标记样品一起与核酸适配体发生特异性竞争识别。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（三）中纳米粒子可以是金属纳米粒子或磁性纳米粒子或高分子化合物。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（四）和（五）中通过检测分子探针的含量，间接检测生物毒素的浓度值，提高表面等离子体传感芯片的可重复利用性，适用于各种生物毒素的检测。