[发明专利]截短的细粒棘球蚴EG95蛋白重组毕赤酵母高密度发酵工艺

权利要求书

1.截短的细粒棘球蚴EG95蛋白的tEG95重组毕赤酵母高密度发酵方法中发酵前的工作种子培养方法，其特征在于：挑取1个重组酵母工程菌EG95-1的单克隆于YPD液体培养基中，培养至菌液OD₆₀₀为5.0左右，得到一级种子培养液；再将上述培养液转接BMGY培养基，培养至菌液浓度OD₆₀₀达到40.0左右，得到发酵工作种子液，上述培养过程均在28℃下进行，其中的重组酵母工程菌EG95-1单克隆菌株于2012年02月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No5764。

2.截短的细粒棘球蚴EG95蛋白tEG95重组毕赤酵母高密度发酵方法，其特征在于将由权利要求1所述的将发酵工作种子液按1∶10的体积比转接于2000mL BSM液体培养基，调整培养基pH到5.5开始增菌，增菌过程补加含重量体积比为50％甘油和体积比为1.2％PTM1的水溶液的补料1溶液，待菌液OD₆₀₀达到90.0左右，即重组酵母菌湿重达到140mg/mL左右，停加补料1溶液并继续培养至耗尽甘油，再在培养体系中分阶段加入含体积比为1.2％PTM1的甲醇溶液的补料2溶液进行蛋白诱导表达，第一阶段的补料2的补加流速为10mL/h，补加3h，停加补料2约1h，至诱导后4h；第二阶段的补料2的补加流速为15mL/h，补加5h，停加2h，至诱导后11h；第三阶段的补料2的补加流速为20mL/h，补加10h，停加3h，至诱导后24h；第四阶段的补加流速为25mL/h，补加72h，至诱导后96h，整个发酵过程的温度均为28℃。