[发明专利]柑橘黄龙病的LAMP快速检测方法

权利要求书

1.一种柑橘黄龙病的LAMP快速检测方法，其特征在于：包括用于检测柑橘黄龙病的LAMP扩增特异性引物组，分别为：

omp-FIP

5′-GCCATGATACGACGCTTAGCA-TTGAGTGAGGGAGATCC AAT-3′

omp-BIP

5′-CTGAAGTCAATATTTCGCAATTGCC-TTTACGCTCACCCTC AGA-3′

omp-F3 5′-ATTCGGCGTGAACTTGAA-3′

omp-B3 5′-GCTATACCTACAGAACCAGC-3′。

2.根据权利要求1所述柑橘黄龙病的LAMP快速检测方法，其特征在于：按照如下步骤完成：

(1)柑橘黄龙病病叶总DNA提取，采用CTAB法提取柑橘黄龙病DNA得到模板DNA溶液；

(2)柑橘黄龙病的LAMP扩增，配置反应体系为25μL，所述反应体系中各组分的含量为5×Reaction Buffer、8mM MgSO₄、1.2mMdNTPs、Bst DNA聚合酶8U、1.6μM omp-FIP、1.6μM omp-BIP、0.2μM omp-F3、0.2μM omp-B3、模板DNA 1.0μL，加ddH₂O补足25μL，混匀，于63℃水浴锅中反应70min，之后在80℃下灭活5min结束反应；所述5×Reaction Buffer含100mM Tris-HCl pH 8.8、50mMKCl、50mM(NH₄)₂SO₄、0.5％Tween 20。

(3)反应结束后，观察浊度，白色浑浊即为阳性，否则为阴性；或在反应液中加入SYBR Green I显色液，出现绿色表明为阳性，橙色则表明为阴性；或用琼脂糖凝胶电泳，获取电泳图谱，图谱中出现特征性梯状条带为阳性，未出现特征性梯状条带为阴性。