[发明专利]一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组病毒，尤其涉及一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用。

背景技术

细菌人工染色体(bacteria artificial chromosome，Bac)是高通量低拷贝的质粒载体，最大可以容纳300kb的DNA，并能稳定传代。Bac技术为疱疹病毒反向和正向遗传研究提供了新方法(Shizuya H，Birren B，Kim U J，et al.Cloning and stable maintenance of 300-Kilobase-pair fragments of human DNA in Escherichia coli using an F-factor-based vector[J].Proc Natl Acad Sci USA，1992，89(18)：8794-8797.)。目前该技术在多种疱疹病毒相继成功应用，如1型单纯疱疹病毒(StavropouLos T A，Strathdee C A.An enhanced packaging system for helper-dependent herpes simplex virus vectors[J].J Virol，1998，72：7137-7143.)、EBV(Delecluse H J，Hilsendegen T，Pich D，et al.Propagation and recovery of intact，infectious Epstein-Barr virus from prokaryotic to human cells[J].Proc Natl Acad Sci USA，1995：8245-8250.)、人巨细胞病毒(HCMV)(Wagner M，Ruzsics Z，Koszinowski U H.Herpesvirus genetics has come of age[J].Trends Microbiol，2002，10(7)：318-324.)、BHV-1 ZJ株(张存，叶伟成，王一成，等.牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性[J].科学通报，2009，54(24)3823-3829.)等。TK基因缺失的猪伪狂犬病毒(PRV)ZJ株Bac也于2010年成功克隆(尹文玲，叶伟成，张存，等.猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建[J].病毒学报，2010，26(4)：331-335.)。

PRV属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科成员，大小约143kb，含有多个可缺失的非必需基因。PRV基因缺失疫苗的成功应用，使该病在世界范围内得到了有效控制。目前以PRV-Bac系统为载体表达其它病原主要保护性抗原基因已成为基因工程活载体疫苗研究的热点(Osterrieder N，Schumacher D，Trapp S.Establishment and use of infectious bacterial artificial chromosome(BAC)DNA clones of animal herpesviruses[J].Berl Munch Tierarztl Wochenschr，2003，116(9-10)：373-380.)。迄今为止，以伪狂犬病毒为载体已成功表达了CSFV E2(潘兹书，张楚瑜，陈玉栋，等.表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建[J].武汉大学学报(理学版)，2002，48(4)：466-470.)、PPV VP2(吕建强，陈焕春，赵俊龙，等.表达猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特征研究[J].病毒学报，2004，20(2)134-137.)、PCV2 Cap(琚春梅，陈焕春，郗鑫，等.表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定[J].中国农业科学，2006，39(8)：1716-1722.)和PRRSV GP5蛋白(方六荣，肖少波，江云波，等.表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+的构建及其生物学特性初步探讨[J].病毒学报，2004，20(20)：250-254.)。

猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和PRV是猪的三种重要的传染病，经常存在混合感染，因此研制出这三种病毒的重组疫苗对生产实践具有重要的意义。

发明内容